组织培养3、4理念.ppt

Chapter 3 培养基 培养基(culture medium)的配制是组培工作的核心。外植体之所以能沿着不同的组培途径生长、分化，其主要原因就在于培养基中的物质成分对细胞的生长发育起着定向调控作用。 在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同。因此，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一种合适的培养基，培养才有可能成功。 事实上，培养基的研制始终伴随着组培技术的发展，整个组培的发展史就是一部培养基的研制史： 1902 Haberlandt knop培养液＋Suc 失败 1934 White 等人 无机＋有机（ VB）＋ IAA 脱分化 1957 Skoog Miller CYT/IAA 激素调控 再分化 1958 Steward 首次实现植株再生 里程碑 1965 Vasil 成分已知的合成培养基 单Cell 培养基的名称，一直根据沿用的习惯。多数以发明人的名字来命名，如White培养基，Murashige和Skoog培养基(简称MS培养基)，也有对某些成分进行改良称作改良培养基。 一、培养基种类 各种培养基都是建立在White和Gautheret培养基基础之上的。培养基数目之多到无法统计的地步。常用培养基不下几十种。 二、培养基特点 1.MS培养基：无机盐和离子浓度较高，比较稳定的离子平衡溶液。养分数量和比例较合适，硝酸盐含量较其他培养基高，广泛应用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养。 2.B5培养基：含有较低的铵，这个成分可能对不少培养物生长有抑制作用，双子叶特别是木本植物适合于B5培养基。 3. White：无机盐数量较低，适合于生根培养。 4.NT培养基：适合于烟草叶肉原生质体培养。 5.KM-8P培养基：有机成分较复杂，包括了所有的单糖和纤维素、呼吸代谢中的主要有机酸。广泛应用于原生质体和细胞融合的研究。 6.N6培养基：成分较简单，且KNO3和(NH4)2SO4含量高，应用于花药培养和组织培养。 三、培养基成分 1、基本培养基：提供组织生长的基础营养物质。 基本培养基＝无机＋有机 2、培养基的成分： 培养基=无机＋有机＋激素＋固化剂＋其它 1）无机成分 ①大量元素（0.5mmol/L 或 100mg/L ）: N、 P、K、Ca、Mg、S； ② 微量元素（0.5mmol/L 或 100mg/L ）: 铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、钼(Mo)、钴(Co)、氯(Cl)。 2）有机成分 有机成分（organic compound）：指植物生长发育时必需的有机碳、、氢、氮等物质。主要有糖、维生素、肌醇、氨基酸等。 ①糖（sugar） 糖既可作为碳源，为培养的外植体提供生长发育所需的碳骨架和能源外，还具有维持培养基一定渗透压的作用。常用蔗糖，浓度为1～5%。 ②维生素（vitamin） 维生素类化合物在植物细胞里主要以各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。使用量通常为0.1～1.0mg/L。 ③肌醇（inositol） 肌醇能帮助活性物质发挥作用，使培养组织快速生长，促进胚状体及芽的形成。用量一般为50～100mg/L。 ④氨基酸及有机添加物（amino acid and organic addition） 一种重要的有机氮源，除构成生物大分子的基本组成外，还具有缓冲作用和调节培养物体内平衡的功能，对外植体芽、根、胚状体的生长、分化有良好的促进作用。 天然复合物 大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。由于成分复杂，实验可重复性差，应尽量不用或少用。 但有时大胆启用此类物质可能起到意想不到的效果。 常用的有：CH（水解酪蛋白）、CM（椰子汁）、ME（麦芽浸提物）、YE（酵母浸提物）、TJ（番茄汁）、香蕉、马铃薯…… 1)椰乳（CM） 是椰子的液体胚乳。它是使用最多、效果最大的一种天然复合物。一般使用浓度在10%—20%，与其果实成熟度及产地关系也很大。它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用。在马铃薯茎尖分生组织