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荧光定量PCR原理和方法介绍 提 纲 荧光定量PCR的原理和应用 荧光定量PCR实验的设计和优化 仪器软件的操作和仪器的维护 引物和探针的设计 常见问题及解决方案 荧光定量 PCR的原理 PCR 反应过程 d.NTPs Taq 酶 Primers 反应组分 变 性 延 伸 重 复 退 火 循环2 4个拷贝 循环3 8个拷贝 Cycle # PCR反应模式 终点检测 In Addition 同一样品重复96次的实验结果 Lockey etal. (1998) Biotechniques 24:744-6 终点法和实时法的结果比较 实时PCR（real time PCR） 能够在扩增的同时对扩增产物的量测量或定量。 Ct值的设定 扩增产物的相对荧光强度达到设定的阈值时所经过的循环数。 1) 设定基线 2) 设定阈值 3) CT 值就是扩增曲线和阈值的交点所指示的循环数。 阈值设定的越高， CT值越大 。 Ct值和起始模板量的对应关系 Correlation Coefficient, Slope and PCR Efficiency (cont.) 荧光PCR的原理 插入染料法 杂交探针法 d.NTPs Taq酶 Primers 反应组分 变 性 插入染料方法的原理 插入染料 l 延 伸 检测激发的