高效液相色谱hplc选编.pptVIP

成员：冯斌，叶超 ，夏媛媛 高效液相色谱分析 HPLC 特点介绍 特点： 高压、高效、高速、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 高效液相色谱仪简介 1.贮液瓶 2.高压输液泵 3.进样器 4.色谱柱 5.检测器 6.记录装置 分类 一、液-固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography） 二、液-液分配色谱（liquid- liquid partition chromatography） 三、离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 四、离子色谱（ion chromatography） 五、离子对色谱（ion pair chromatography） 六、排阻色谱（size- exclusion chromatography） 七、亲和色谱（Affinity chromatograph） 离子对色谱（ion pair chromatography） 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子 或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水 性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十 六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子 Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离 子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X - 后；在两相间分配。 排阻色谱色谱 （size- exclusion chromatography） 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原 理：按分子大小分离。小分子可以扩散 到凝胶空隙，由其中通过，出峰 最慢；中等分子只能通过部分凝 胶空隙，中速通过；而大分子被 排斥在外，出峰最快；溶剂分子 小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰；可对相对分子质 量在100-105范围内的化合物按质量分离。 亲和色谱（Affinity chromatograph） 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和 力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 选择流动相时应注意的几个问题 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。 应用 在食品安全检测中的应用 —乳制品中的三聚氰胺检测 —山梨酸,苯甲酸,等食品添加剂的检测 在食品营养标签检测中的应用 —氨基酸的检测 —维生素的检测 在其它行业中的应用 操作 高效液相色谱实际操作