第二章紫外可見分光光度法.ppt

紫外-可见分光光度法 ultraviolet-visible spectrophotometry 第一节 概述 第二节 光的吸收定律 第三节 分光光度计的主要部件和类型 第四节 分光光度法的定性和定量 第五节 分光光度法的误差来源及其消除 第六节 提高分析灵敏度和准确度的方法 第七节 样品处理及分离 第一节 概 述 紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry，UV-VIS)是根据溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能（200-800nm）的吸收来研究物质的组成含量和结构的方法。 它广泛用于无机和有机物的定性和定量测定，是卫生分析中常用的分析方法。 一、电磁辐射的性质 电磁辐射(Electromagnetic radiation)是一种以巨大速度（在真空中为2.9979×1010cm/s）通过空间传播的能量，最小单位是光子。它具有波粒二象性，既具有粒子的性质，也具有波动的性质。 就波动性而言，其特征是每个光子具有一定的波长?。 在一定的介质中，它们之间的关系为 式中C是电磁辐射在真空中的传播速度。 就辐射的粒子性而言，其主要特征是每个光子具有能量E，其与频率及波长的关系为 式中h是普朗克常数 ?Planck constant?，其值为6.63×10-34 J/S。 电磁辐射按波长顺序排列所画成的图表称为电磁波谱。 紫外及可见光区在整个电磁波谱区内仅占很小的一部分。 波谱区 　 波长范围 nm 　光子能量ev 　 跃迁能级类型 近紫外 　200-400 　6.2-3.1 分子电子能级 可 见 400-750 3.1-1.7 二、物质对光的吸收 当光通过透明物质时，其中某些波长的光会被选择性地吸收而使透射光强度减弱，则物质对光产生吸收作用。 紫外-可见分光光度法、原子吸收分光光度法、红外吸收光谱法就是根据物质对光的吸收特性而建立的定性、定量分析方法。 　　发生电子能级间跃迁需要的能量约为1-20ev，相应的波长为1230-62nm。由电子跃迁产生的分子吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱或电子光谱。　　发生分子振动能级间跃迁需要的能量较小，一般在0.025-1ev之间，相应的波长约为50-1?m，它属于红外光区。由此产生的分子吸收光谱称为红外吸收光谱或振动-转动光谱。　　发生分子转动能级间跃迁需要的能量更小，约为0.004-0.025ev之间，相应的波长约为50-300?m，属于远红外光区。这种分子吸收光谱称为远红外吸收光谱或转动光谱。 当分子吸收一个具有一定能量的光子时，分子就由较低的能级跃迁到较高的能级，如从E0?E1。被吸收光子的能量必须与分子跃迁前后的能级差恰好相等，光子才能被吸收。即分子吸收具有量子化的性质。 　　由于物质的结构决定了基态和激发态间的能量差，所以物质只能吸收其特定波长的光，即物质对光的吸收具有选择性。 有色物质吸收了可见光中的部分光，显现出吸收光颜色的补色。 波 长nm 颜 色  吸收的 观察到（透过）的  380-435 紫 黄绿  435-480 蓝 黄  480-490 绿蓝 橙  490-560 蓝绿 红  500-560 绿 红紫  560-580 黄绿 紫  580-595 黄 蓝  595-650 橙 绿蓝  650-780 红 蓝绿 分子的能级跃迁是分子总能量的改变。当发生电子能级跃迁时，总是伴随着振动能级