应用全基因组PCR扫描方法进行猪链球菌基因组结构的比较分析.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年第 37卷第 6 期: 683阳688 喝房 ;25335;二 应用金基因组 PCR 扫描方法进行猪链球菌 基因组结构的比较分析 熊朝晖①↑卫灿东时杨剑①彭俊平①徐星烨①玉宇③金奇①①* (①中国疾病预防控制巾心病毒病预防控制所病毒基因工程阔家最点实验室，北京 100176; @中阁疾病预防控制中心， 北京 100050; @巾阔医学科学院病原使物学研究所，北京 100730) , 11 摘要 2005 年，在中国四川局部地区爆发人感染猪链球菌疫情，因其感染人数多，病死率高引 起关注，为了确定该致病菌是否发生变异，通过应用金基因组 PC议扫描方法(WGPScaning)、多位 点序列分型技术(MLST)以及毒力相关基因的序列测定，比较分别来自本次疫情中的病人和病猪、 以前流行期间感染的病人分离的菌株以及网上公布的来自欧洲的猪链球菌基因组序列，结果显 示各前才来的基因组结构相似，毒力相关基因没有差异，所有菌株都属于 ST1序列群，说明本次引 起凹川疫惰的菌株未发生明显的基因组结构的改变. 关键词 猫链球菌金基因组 PCR 扫描多位点序列分型 2005 年 7 月 22 日，中国卫生部向世界卫生组织 正式通报在中国四川局部地区爆发人感染猪链球醋 疫惰，第一例人感染病例于 6 月底发生在四川省资阳 县，截止到 2005 年 8 月 16 日，累计报告人感染猪链 球菌病例 215 例，其中死亡 39 例，主要症状包括商 热、不适、恶心、呕吐，严重病例伴随有脑炎、皮下 tf:lltrl、中毒性休克和昏端.据报道，几乎所有病人均 为当地农民和屠夫，其中约 80%的病人参与 处理或销售俯猪，超过 40%的病人年龄在 50-60 岁之 间，对来自人和猪的样本进行检测，排除包括流感和 尼帕病毒等病原体，确认为猪链球菌 2 型感染，同时 由中阔农业部进行的研究发现该地区的生猪中存在 猪锚球首~ 2 型细酶，没有证据显示发生了人与人之间 的传播川(lmedia_centre/news/ newshtm). 猪链球菌是革兰氏阳性球脯，兼性厌筑，可引起 收稿日期: 2007翩。4俨 16; 接受日期: 2007阳侃-26 E革家高技术研究发展计划(863 计划)项目(批准号: 2005日A711A09)资助 ↑网络贡献 *联系人，巳mail: z.dsys@ 猪的发病，表现为急性败血:IiE、脑膜炎、关节炎、支 气管炎、心内膜炎，可导致急性死亡，根据英膜多糖 抗原的不间，可划分为 35 个血清型，其中猪链球首}? 2 型是与疾病有关的最常见血清型，也是人曾共患病的 主要病鼠，人感染猪链球菌可导致脑炎、败血症、耳 聋、肺炎、心内膜炎、关节炎，严重的病例发生中毒 性休克综合征，导致多脏器衰竭及死亡.在过去的报 道中，该病死亡率约为 7%，传播途径才主二耍为捕猪的 血液戚分撼物通过破损的皮肤等侵入人体i仪2丸口，3气 染猪链球菌井寻引|起发病的↑情青i况兑比较少见.1968 年丹麦 学者首次报道了人体感染猪链球菌导致脑膜炎的情 例i州，此后，在中国香港、英国、加拿大、德国、法 国和瑞典也陆续报道了人感染猪链球菌的零星病例. 目前全球大约有 200 余例人感染猪链球菌病例报告 [川]，许多病例并不严壤，只有少数病例症状严 发生脑炎和中毒性休克综合怔(TSS)，导致死亡，然 684 中国科学 C 辑生命科学 第 37 卷 而，本次爆发的疲情具有感染人数多(215 人)、病死 率高(18%)以及明显的地城传播等特征.为了能够进 一步了解这次发生的不同寻常的爆发疫情，本研究 通过应用全基因组 PCR 扫描方陆(WGPScaning)、多 位点序列分型技术(MLST)以及毒力相关基因的序列 测定，比较分别来自本次疫情中不同症状的病人和 病猪、以前流行期间感染的病人分离的商株以及网七 公布的来自欧洲的猪链球菌基因组序列，以确定该 致病菌是否发生变异. 1 材料与方法 1.1 菌株 本研究中所使用的菌株情况见表 1，菌株分离白 中罔 1998 年及 2005 年猪链球醋流行期间，由中国疾 病预防控制中心传染病预防控制所提供. 1.2 号|物设计 根据猪链球酶陶株 PII7基因组序列，本项目设 计了 406 对号 l物来扩增能覆盖整个基因组的 406个片 段，这些片段末端两两重叠，引物平均长度为 21 个 碱基，该基因组序列信息来自英国 Wellcome Trust Sanger 研究所猪链球菌测序工作组(ftp://ftp.sanger. ac. ukJpub/pathogens/ss)，所用扩增引物序列详见 lS.suis/Ss_primer.htm. 1.3 基剧组 DNA 提取与 PCR 扩增分