干细胞+IPS.docVIP

4.1干细胞的特征 1. 干细胞是具多潜能 2. 具自稳定性，自稳定性是其区别于肿瘤细胞的本质特征 3. 增殖速度较缓慢 4. 干细胞能无线的增殖分裂 5. 干细胞可连续分裂几代，也可在较长时间内处于静止状态 6. 干细胞通过两种方式生长，一种是对称分裂——形成两个相同的干细胞，另一种是非对称分裂——由于细胞质中的调节分化蛋白不均匀地分配，使得一个子细胞不可逆的走向分化的终端成为功能专一的分化细胞；另一个保持亲代的特征，仍作为干细胞保留下来。分化细胞的数目受分化前干细胞的数目和分裂次数控制。 干细胞内部，以及外部与其生境细胞间有特定的信号传导通路，调节自我更新和分化。 4.2胚胎干细胞（ES cell） 胚胎干细胞（ES）是指从早期胚胎的卵裂球、囊胚细胞分离培养和建系的细胞。而从胚胎生殖嵴中PGC分离培养建成的称胚胎生殖细胞,简称EG细胞。 它们统称胚胎性干细胞 4.2.1ES和EG细胞系基本特性 （1） 体外能无线增殖 假使在培养条件合适时，ES细胞可以在体外无限增殖。但实际上，传代次数越多，ES细胞会像常规细胞一样，出现核型不正常的情况，并失去了ES细胞原有的一些重要特性 （2） 体外产生分化细胞 1981-2003，这2类胚胎干细胞所分化的细胞都是体细胞 2003-2004，证明体外培养的ES细胞能产生雌、雄两性的生殖细胞，实现了体外培养的ES细胞也能表达“安全性”概念，这是ES细胞体外定向诱导分化的一个重大突破。 （3） 体内产生畸胎瘤 ES和EG细胞若接种于免疫缺损小鼠腋窝等下，可形成由内胚层、中胚层、外胚层多种细胞构成的畸胎瘤。 （4） 巢状生长有多能胚胎干细胞分子标记 （5） 染色体数目和核型正常经体外传代培养后具有正常的染色体数目和二倍 体核型，即使冻存苏后仍然保持这种特性 （6） 遗传可操作性 由于ES细胞在体外可以不断自我增殖，又具有发育的全能或多能性，并能通过构建嵌合体产生有功能的生殖细胞。这为通过基因工程途径改造物种提供了独特的、无与伦比的受体细胞。 （7） 形成嵌合体实现种系传递 4.2.2胚胎干细胞的鉴定 ① 首先要鉴定是否保持正常的核型 ② 通过胚胎期特异表面抗原来监测 ③ 巢素蛋白（nestin）阳性 ④ 胚胎干细胞碱性磷酸酶活性高，分化的细胞较低 ⑤ 人和小鼠都表达转录因子Oct-4 ⑥ 端粒酶活性极高，而分化的细胞则很低 ⑦ 体外诱导分化，可以分化为三胚层的不同细胞谱系 ⑧ 体内移植至裸鼠腋下，形成的瘤体应包含多种类型 4.2.3 ES细胞分化潜能的监测 ① 将ES细胞给同源动物或裸鼠皮下注射会形成复杂的混合组织瘤 ? 瘤组织包括胃上皮（内胚层）；骨和软骨组织、平滑肌、横纹肌（中胚层）；神经表皮、神经节和复层鳞状上皮（外胚层）；说明ES可分化为三个胚层 ? 形成胚状体（拟胚体）： ? ES在体外合适的培养条件下，部分能形成胚状体。 ? 嵌合体实验： ? 将ES与正常胚胎嵌合；（人不能形成嵌合体，伦理学原因） 嵌合胚：说明早期卵裂球有同等的发育潜力。自然人群中也出现过同时有XX型和YY型细胞的人。 胚胎干细胞：保持了分化为胚胎本体的潜能的、可在体外增殖的胚胎细胞。在基因功能研究和疾病治疗方面有重要的作用。 4.2.4 胚胎干细胞的分化能力 胚胎干细胞能分化成为体内全部200多种细胞。 但其应用于临床尚需解决定向分化和致瘤性两大难题。 全能干细胞：能分化成所有的细胞类型（ES,EG） 多能干细胞：能分化为某一类组织中的所有细胞类型（造血干细胞，神经干细胞） 4.3 成体干细胞 是指一群分布在成体组织中尚未分化的、具有自我更新潜能并负有构建和补充某组织的各种类型细胞的干细胞，故又称组织干细胞。 在正常生理条件下 ，倾向于分化成并更新所在组织的各种细胞。但在特定的外界条件下 ，一种组织的成体干细胞能够超越该特定组织、胚层分化成其他组织的功能性细胞，补充参与其他组织损伤的修复等。 成体干细胞 造血干细胞，神经干细胞，胰腺干细胞，肝脏干细胞，肌肉干细胞。 造血干细胞的特征： 形态：类似小淋巴细胞 表面标志：CD34+、CD38-、Lin-、HLA-、DR+、Thy+、CD45RA-、CD71-其中CD34+是临床应用最多的造血干细胞标志物。 HSC的鉴定——将分离的细胞植入致死量照射的小鼠体内或SCID鼠体内，可长期重建多谱系造血 血细胞的形成与更新： 胚胎发育期，血细胞发生于中胚层的血岛。 鸡血岛位于胚盘外侧覆盖在卵黄囊上的胚外中胚层上，人类的也是在相应部位覆盖，在卵黄囊上的中胚层上发现的。 此后，干细胞迁移到肝脏、脾脏，也可能到达胸腺。最后，它们在骨髓中增殖。 出生后的哺乳动物，干细胞只占骨髓中总体细胞的0.01%，它们是提供所有细胞的唯一来源