浅析高效液相色谱在药物分析中的应用_论文.docVIP

浅析高效液相色谱在药物分析中的应用 班级10级生物技术 学号110122801252 姓名冯越越 摘要 高效液相色谱技术是现在检测防腐剂的常用技术，通过此技术同时检测多种防腐剂，不仅省时而且省力。本实验的难点就是确定流动相的组成、配比、流速以及检测波长，以求同时检测出以上四种防腐剂。确定方案之后，本实验的重点就是样品的前处理，样品的检测，检测方法的稳定性与准确性。本论文的目的旨在准确测定防腐剂的含量，并希望引起广大消费者的关注。 关键词 液相色谱；气相色谱；药物分析 引言 HPLC近年来在食品分析检测上应用后，扩大了分析检测范围，提高了分析水平，尤其对食品中残留的微量，痕量有毒有害物质，能快速，准确的分析出来，进一步提高了食品卫生质量，保障了食品安全和人民身体健康，促进了食品出口。HPLC法在食品分析检测中有广泛的应用前景。 1高效液相色谱的简介 高效液相色谱简称HPLC，又称高速或高压液相色谱。该法吸收了普通液相层析和气相色谱的优点，经过适当改进发展起来的，既有普通液相层析的功能，又有气相色谱的特点（即高压，高速，高分辨和高灵敏度）。HPLC是近年来迅速发展起来的一项新颖的分离技术，不仅适用于很多不易挥发，难热分解物质（如蛋白质，肽类，氨基酸及其衍生物等）的定性定量分析，而且也适用于上述物质的制备和分离。HPLC法由于兼备液相和气相两种色谱分析方法的优点，近年来在食品检测和分析上应用并飞速发展。 1.1HPLC与气相柱色谱法(GC)相比较，主要有以下几点优势： (1) GC的分析对象仅限于蒸汽压低、沸点低的样品(仅占有机物总数的20%)，不适于分析高沸点有机物、高分子化合物、热稳定性差的有机物及生物活性物质。而HPLC不受此限制，能对80%的有机物进行分离与分析。 (2)GC流动相为惰性气体，不能与待测组分发生作用。HPLC流动相选择余地大，可与待测组分发生作用，而且通过改变流动相的组成，可改善分离的选择性(相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数)。 (3)GC通常在高温下进行，HPLC可以室温下进行分离与分析。 (4)非破坏性检测器在HPLC中的使用，可使样品回收(特别是少量珍贵样品)或样品的纯化制备成为可能。 1.2HPLC的特点 (1)分离效能高。由于高效微粒固定相的使用，使理论塔板数可达到103～104块/m，远远高于GC的103左右(填充柱)。 (2)选择性高。因为流动相可与样品组分发生相互作用，所以，通过改变流动相的组成，可以达到控制和改善分离过程选择性的目的。因此，HPLC不仅可以分析不同类型的有机物及其同分异构体，而且已在合成药物和生化药物的生产与控制分析中发挥了重要作用。 (3)检测灵敏度高。HPLC中应用的检测器大多数都有较高的灵敏度。高压输液泵的使用，使HPLC分析一个样品仅需几分钟至几十分钟。［2］ 1.3HPLC的局限性 (1)在HPLC中，所用流动相不止一种(多种)，因此其分析成本高，且易起环境污染；当进行“梯度洗脱”操作时(相当于GC中的程序升温技术)，比GC的程度升温操作要复杂的多； (2)HPLC目前还缺少像GC中的通用型检测器(如TCD、FID); (3)HPLC不能替代GC。当要求柱效高达10万块理论塔板数以上时，只能用GC中的毛细管色谱柱； (4)在200kPa～1Mpa柱压下易分解、变性的生物活性的生化样品，不易用HPLC分析。 1.4高效液相色谱仪 HPLC仪器的工作过程为：高压泵将贮液器(或槽、罐)中的流动相溶剂经进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出(通常要回收)。当注入待测样品时，流经进样器的流动相将样品各组分带入色谱柱中进行分离，分离后的各组分依一定的顺序进入检测器，检测器产生的信号由记录仪记录下来，最后形成液相色谱图。 1.4.1高压输液泵 这是HPLC仪器中的着急部件之一。它一般由贮液器、高压输液泵、过滤器等组成。高压输液泵应该具备密封性好、输出流量恒定、压力平稳、可调范围宽、便于更换溶剂及耐腐蚀等条件。常用的输液泵有恒流泵和恒压泵两种，而恒流泵用的较多(因为它的输出流量能始终保持恒定，与色谱柱引起的阻力大小无关)，而恒压泵用的较少。恒流泵又分为机械注射泵和机械往复泵，后者用的最多。 1.4.2进样系统 由于HPLC色谱柱比GC色谱柱短的多(约5～30cm)，所以，引起色谱峰峰形变宽的因素以柱外因素为主(即：进样系统、连接管道及检测器中存在的死体积)。而柱外展宽(色谱柱外因素引起的峰形变宽)又分柱前和柱后展宽，以进样系统所引起的柱前展宽为主要因素 1.4.3分离系统 色谱柱是其核心部件之一。通常用φ4～5mm，5～30cm长度的不锈钢管作高压色谱柱，内装5～10μm的全多孔型高效微粒固定相。［2］ 1.4.4检测系统 用于HP