GB/T 27765-2011SiO2、TiO2、Fe3O4及Al2O3纳米颗粒生物效应的透射电子显微镜检测方法.pdf

ICS 71．040．99 C 40 雷雪 中华人民共和国国家标准 G．／T 27765--20 11 Si02、Ti02、Fe304及A1203纳米颗粒 生物效应的透射电子显微镜检测方法 Testing methods of Si02，Ti02，Fea04 and A120a nanoparticles biological effect by transmission electron microscope(TEM) 201 1-12-30发布 2012—05-01实施 宰瞀髁鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促1” 刖昌GB／T27765--2011本标准按照GB／T1．1—20 9给出的规则起草。由全国纳米技术标准化技术委员会(SAC／TC9)提出并归口。负责起草单位：中国人民解放军第二军医大学、复旦大学及地科院矿产资源研究所。主要 人：杨勇骥、俞彰、周健雄、张天宝。 1范围Si02、Ti02、Fe304及A1203纳米颗粒生物效应的透射电子显微镜检测方法GB／T27765--2011本标准规定了透射电子显微镜检测含有SiO：、TiO：、Fe。O。及Al：0。纳米颗粒材料的生物试样的技术和 范。适用于SiOz、TiO。、FesOt及AlzOs纳 颗粒材料的生物效应透射电镜检测的生物薄试样超微结构分析。规范性引用文件下列文件对 本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。8873 08生物薄试样的透射电子显微镜一x射线能谱定量分析通则9619 4纳米材料术语ISO／IEC02 ： 5检测和校准实验室认可准则(Geuer“requir mentsfofthec mpetenceofestingandalibrationl boratories)3术语和定义术语和定义适用于本 。．1纳米颗粒nanoparficles尺度的固体粒子。 标准中出现的纳米颗粒材料特指为SiO：、TiO 、Fe O。及A1：O。纳米颗粒材料。2物效应biologicale ect材料与生命过程 相互作用产生 生理功能、生化功能及形态结构的变化3 检测b ological采用生物学、化学 毒理学与医学等领域的实验技术进行检验测量。4 薄试样thinbiologicals le 是指采 超薄切片机切成 、厚度为40nm～100的 试样，用于透射电 观察。4基本原理材料 表面理化特性使 易形成团聚，经分散后与生物体接触 与 体接触后，需采用超微结构制样方法，将其制成生物薄试样，在透射电镜下检测纳米颗粒材料作用于生物 GB／T27765--2011体后产生的细胞及细胞器的超微结构变化，以确定纳米颗粒材料对生物体的生物效应作用。用聚焦的高能电子柬照射生物薄试样的 小区域，入射的电子束大部分透过薄试样，形成透射电子，透射电子中含有大量携带有 内部信息的非弹性散射电子，非弹性散射电子在荧光屏、照相底片或CCD上成像，形成生物薄试样 图像。5仪器设备和材料．1仪器设备．1透射电子显微镜。2超薄切片机。3制刀机。4玻璃刀或钻石刀5恒温烘箱(30℃～70℃)。6 声波清洗仪。2材料戊二醛四氧化锇。乙醇。丙酮s 环 树脂醋酸双氧铀7构橼酸铅6 的 境条件超薄切片机、透射电子显微镜的工作环境应符合以下要求：超薄切片机切片室应为超薄切片专用房间。相对湿度小于60％。温度：(20士5)℃。电源 压：220(1士10％)V。透射电子显微镜2 1电镜室应为电镜专用房间土杂散 磁场干扰应小于0．1pT。 及频率 稳定E220(1士10％)V，50Hz士1]。 具备仪器专用地线，接地电阻应小于100n。 7纳米颗粒材料分散GB／T27765--201．1将纳米颗粒材料与溶剂按一定的比例充分混和。2放人超声波清洗仪中分散。注：建议分散的条件：水温(25～30)℃；功率300w；频率40(1士10％)kH2；时间30rain左右。8生物薄试样制备1纳米颗粒材料．1将不同浓度、已分散的纳米颗粒悬液滴在有支持膜(一般用火棉胶或Fomvar膜)的≠3mm透射电镜专用载网上。2 滴有纳米颗粒材料悬液的电镜专用载网放入恒温烘箱中，60℃烘烤2h。 生物组织取 ：将生物组织在(2～3)％戊二醛固定液(4℃)中迅速切成小于12 213的小块。配制戊二醛固定液可参考附录C。前固定：将小块组织浸泡在20倍体积、4℃的(2～3)％戊二醛固定液中固定(1～4)h，用缓冲液充分漂洗。后 生物小块组织浸泡在1％锇酸，4℃固定2配制锇酸可参考附录D。脱水 用乙醇或丙酮梯度脱水。建议乙醇或丙酮梯度脱水的顺序为：30％、50％、70％、90％乙醇各一次；90％丙酮1次，100％丙酮3次；每次(10～15)rain。