细胞实验原代培养.docxVIP

细胞生物学实验原代培养一、实验目的 1.理解细胞原代培养原理2.了解细胞原代培养的一般方法与步骤3.了解细胞原代培养的应用4.独立进行细胞原代培养操作5.熟悉无菌操作技术二、实验原理细胞培养是生物学和医学研究最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。原代培养:组织直接从机体获取后,通过组织块长出单层细胞,或者用酶消化或机械方法将组织分散成单个细胞开始培养,在首次传代前的培养可认为是原代培养。原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA)处理，使之分散成单个细胞,加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。实验步骤鸡胚成纤维细胞的原代培养（1）入无菌室之前首先穿实验服，佩戴一次性手套、帽子。要用肥皂洗手,用新洁尔灭溶液拭擦双手消毒。（2）关闭已照射超净台台面20分钟左右的紫外灯，打开抽风机清洁空气。打开照明灯。（3）超净台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，并擦拭超净台台面。（4）准备好所需试剂及仪器，摆放在超净台中。（5）按照1%的比例向含10%FCS的DME