RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响.docVIP

·中文论著摘要· RNA干扰抑制FUBP1基因表达对人胃癌细胞系SGC7901生物学功能的影响 南方医科大学 刘一柏 目 的 构建针对靶向基因FUBP1（far upstream element binding protein 1，FUBP1）的慢病毒载体LV-FUBP1-RNAi，转染胃癌SGC-7901细胞，探讨应用RNA干扰技术抑制FUBP1基因的表达对人胃癌细胞增殖、细胞迁移、细胞周期和凋亡等生物学功能的影响，初步评价FUBP1基因沉默在胃癌基因治疗中的应用价值。 方 法 构建三组不同RNA干扰序列的慢病毒载体LV-FUBP1-RNAi及阴性对照序列的慢病毒载体Negative-RNAi，通过慢病毒转染预实验选择合适的感染复数分别转染胃癌细胞SGC7901后利用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(QRT-PCR)检测FUBP1在mRNA的表达水平，筛选出有效的RNA干扰序列用于后续实验。将实验分为FUBP1-RNAi组、Negative-RNAi阴性对照组（标记为NC）和空白对照组（标记为CON），应用QRT-PCR 及蛋白免疫印迹（Western blot）检测FUBP1在mRNA和蛋白质水平的表达量。应用CCK-8法检测各组细胞增殖、Transwell及划痕实验检测各组细胞迁移能力、流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况及细胞凋亡。 结 果 成功构建了三组不同RNA干扰序列的慢病毒载体FUBP1-RNAi-KD1、FUBP1-RNAi-KD2、FUBP1-RNAi-KD3；通过慢病毒转染预实验选择MOI=30的感染复数成功转染各组胃癌SGC7901细胞并筛选出有效的RNA干扰序列FUBP1-RNAi-KD2（相对于NC组FUBP1抑制效率高达70.4%）；QRT-PCR结果显示：相对于NC组，RNA干扰组（FUBP1-RNAi-KD2）FUBP1 mRNA的表达量明显下调，抑制率达70.4%（P0.05）；Western blot结果显示：相对于NC组，RNA干扰组FUBP1 蛋白质的表达量明显下调，抑制率达74.4%（P0.05）；CCK-8结果显示：相对于NC组和CON组，RNA干扰组连续5天胃癌细胞增殖倍数降低（P0.05）；PI-FACS细胞周期检测 慢病毒载体FUBP1-RNAi-KD2介导的FUBP1基因沉默能够有效的抑制FUBP1在人胃癌SGC7901细胞系内mRNA和蛋白质水平的表达量；通过RNA干扰技术沉默FUBP1基因的表达能够抑制胃癌细胞SGC7901的增殖，影响细胞周期的分布，将细胞周期阻滞在S期，抑制细胞生长；但是对细胞凋亡及迁移能力无明显影响；通过RNA干扰技术特异而有效的沉默FUBP1基因在胃癌的基因治疗中具有一定的价值。 关键词 RNA干扰；慢病毒转染；远端上游元件结合蛋白1；胃癌；基因治疗 ·英文论著摘要· The effect of RNA interference inhibiting FUBP1 gene expression on the biological function of human gastric cancer cell line SGC7901 Objective This paper aimed to construct FUBP1-RNAi lentiviral vector to transfect into human gastric cancer cell line SGC7901 and investigate the effect of inhibiting FUBP1 gene expression on the biological function of gastric cancer cell proliferation, metastasis, cell cycle and apoptosis. Through this study, we can evaluate the value of FUBP1 gene silencing in the treatment of gastric cancer. Methods To design FUBP1-RNAi lentiviral vector with three different kinds of RNA interference sequences and Negative-RNAi lentiviral vector with negative control sequence. Then choice the reasonable MOI via preliminary experiment of lentiviral transfection to