苯酚硫酸法测多糖含量.docVIP

一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制 1. 浓硫酸：分析纯，95.5% 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。 2、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）mg于ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.、0.、0.、、、、及ml，各以蒸馏水补至.0ml，然后加入%苯酚ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置以后于490nm测光密度，以.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 1 2 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液（mL） 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 蒸馏水（mL） 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（mL） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 3 注意事项 此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。　　（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。 　　（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。 正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要准确。