生物样本的常用保存方式及效果梳理幻灯片.docxVIP

生物样本的常用保存方式及效果梳理幻灯片.docx

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生物样本的常用保存方式及效果梳理 生物样本是医学研究的重要资源,病理学组织和细胞样本是临床常见的生物样本,主要来源于临床手术、活检、穿刺等操作,可通过制备切片、涂片以及提取生物大分子,用于病理诊断及医学研究。样本是医学研究的基础,其质量在很大程度上决定着研究结果的准确性和可靠性。随着基因组学、转录组学以及蛋白质组学等研究手段的飞速进步,各种分析技术对生物样本的质量也提出了更高的要求[1, 2]。 生物样本的质量鉴定目前尚未有统一标准,但其提取产物DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的质量控制已较为成熟。因此,为了评估各保存方式的效果,可以通过检测样本中提取的生物大分子的质量来间接衡量生物样本的质量[3]。目前生物样本及其提取产物主要有深低温和常温两大类保存方式,针对不同科研需求,更多的样本保存方式也不断相继问世,但各种方式的保存效率不尽相同[4]。本文将对当前国内外常用的样本保存方式及其效果进行分析和小结,为临床生物样本的保存提供可行的建议,为获得高质量的样本提供理论基础。 一、深低温保存 相比甲醛液固定的组织,低温冻存组织中可以提取到更高质量的生物大分子,以满足现代检测技术的需要[5]。但有研究表明,-25℃低温冻存约1年后,组织中的蛋白活性发生了显著下降[6]。相比之下,深低温冻存(-196~-80℃)的保存效果更佳,已成为一种广为接受的生物样本长期保存方式[7]。 1. -196℃/-150℃深低温冻存是理想的样本保存方式:目前,液氮保存(-196℃)是公认最可靠的样本保存方式,样本在此温度可长期保持稳定[8, 9]。然而,由于样本完全浸没在液氮中,游离的组织碎片可能会带来交叉生物污染的潜在风险,因此催生了气相液氮(-150℃)这种新型保存方式。所谓气相液氮保存,就是将样本置于液态氮以上、气相氮的包围之中,可以很好的避免交叉污染的风险。除此之外,还可以通过电力冰箱制冷达到-150℃的深低温。对于-150℃深低温的保存效果,目前虽缺乏长期数据支持,但从理论上说,该温度应该可以满足样本的长期保存需求。因为-137℃是水的玻璃化温度,低于此温度时细胞内能导致??容物降解的一切生化反应均处于失活状态,可长期保存样本并保证其质量[10]。 但是,又有研究发现,一般的组织冻存液由DMSO、血清、细胞培养液组成,需要现用现配。但是由于血清的成分不定,冻存液的稳定性差,使得这种组织冻存液的保质期较短,保存条件也较为苛刻。使用现有的组织冻存液冻存肿瘤组织时,只有极少数的肿瘤组织可以复苏或以肿瘤细胞的形式进行传代,更无法以原代肿瘤的形态增殖,且极易丢失肿瘤的原始突变,只能获得分子水平的数据信息。故而,现有的组织冻存液的应用范围狭窄,降低了肿瘤组织样本的应用价值和科研转化能力。 上海赛立维生物科技有限公司研发的玻璃化冻存技术,使肿瘤组织暂时脱离生产状态,可在液氮中长期保存,使得肿瘤组织可以随时制备、保存和应用,这样的保存方式操作简便,且成本低廉。移植后可使之以原代肿瘤的形态增殖或传代,且保存了肿瘤的原始基因突变。成功突破了活肿瘤组织冻存复苏后存活率低的难题,使得冻存的肿瘤细胞可长期保存肿瘤组织活性,组织复苏后可维持与新鲜肿瘤组织几乎相同的形态特征和功能。 总结,赛立维研发的组织冻存和复苏试剂盒有如下优势: (1)冻存后可长期保存(10年)。 (2)复苏后形态功能与新鲜组织一致。 (3)复苏后仍可分离原代肿瘤细胞。 (4)冻存前后PDX成瘤能力基本不变。 (5)可替代冰冻切片和石蜡固定组织。 (6)实现DNA、RNA和蛋白活性保存。 (7)手术标本、活检组织均适用。(详情请联系产品经理:021杨经理)) 2. -80℃深低温冻存联合核酸稳定剂也可作为较理想的样本保存方式:在不具备液氮保存条件的生物样本库,也可考虑使用-80℃深低温冰箱代替液氮来保存组织样本。那么,-80℃深低温冻存对组织的保存效果究竟如何呢?有研究发现,组织长期保存在-80℃环境,可以很好地保护其内部的蛋白成分,也可以提取到高质量的RNA,与冻存在气相液氮(-150℃)中相比没有显著差异[11];但也有研究发现,组织冻存在-80℃深低温环境,虽然其DNA产量、完整性以及RNA产量可以维持长达7年而不发生明显改变,但其RNA完整性却在冻存5年后开始下降[12]。因此有研究者建议将组织小份分装,加入RNA特异性稳定剂后再冻存于-80℃环境,更有利于组织内RNA的保存[10]。关于蛋白质的保存,目前以深低温冻存为主,可以很好地保护其稳定性。也有研究表明,冻存之前添加蛋白保护剂,如海藻糖等,保存效果更佳[13, 14]。除外以上对生物大分子的检测,还有研究者对组织进行苏木素-伊红染色,发现组织冻存于-80℃深低温27年后,光镜下其形态结构仍保持良好状态[15]。以

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