实验一ABO及Rh血型鉴定2013.3指导.pptVIP

实验一ABO血型鉴定和Rh血型鉴定 临床检验诊断学实验室 实　验　内　容　 一、5%红细胞悬液的配制二、ABO血型鉴定（试管法、纸片法） 三、Rh血型鉴定 ? 一、5%红细胞悬液的配制　 原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。 器材:　小试管（玻璃及塑料皆可）、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。 试剂:　生理盐水。 标本:　抗凝或非抗凝静脉血。 　 操　作 1、全血2ml 1000g离心5min，吸取分离上清至另一干净试管（备用）； 2、压积加生理盐水约2～3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液； 3、重复离心（1000g，60s）洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞； 4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细胞悬液。 目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。 原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血型。 正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B）来测定红细胞上有无相应的抗原； 反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。 二、ABO鉴定　 器材:　记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、显微镜。 试剂: 1. ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)； 2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。 3. 生理盐水。 标本:　抗凝或非抗凝静脉血。 操作（试管法） (1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、Oc。 (2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。 (3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。 （4）离心：1000g离心15秒。 (5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 mf 混合凝集外观（mixed field）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 － 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 红细胞凝集强度判断标准 试管法结果判定 表l ABO血型正反定型结果 试剂血清+受检红细胞 受检血清+试剂红细胞 （正定型） （反定型） -A -B 受检血型 Ac Bc Oc ＋ － A 　　－ ＋ － － ＋ B 　　＋ － － － － O 　　＋ 　＋ － ＋ ＋ AB 　　－ － － 判断标准 操作：玻片法(鉴定纸板) (1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10％红细胞悬液l滴，混匀。 (2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。 (3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。 玻片试验时可用低倍镜观察结果。 正定型 反定型 注意事项 1.试剂　 2.悬红　 3.蛋白　 4.溶血 5.冷抗体 　6.老年、儿童　 7.污染 目的 掌握Rh血型鉴定的原理、方法。 原理 Rh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。 　　　在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。 三 、 Rh血型鉴定 器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、鉴定纸板、显微镜、离心机。 试剂 1.Rh抗血清：常用的为IgM抗抗D（其他为抗C、抗c、抗E、抗e）。 2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份 3.生理盐水。 标本 静脉血。 操作(盐水试管