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生化调研报告 刘攀 药1201 2302120110 发芽马铃薯毒素的调研报告 马铃薯，茄科茄属，一年生草本植物，别称地蛋、洋芋、土豆等。土豆的人工栽培最早可追溯到大约公元前8000年到5000年的秘鲁南部地区。 土豆，高15-80厘米，无毛或被疏柔毛。茎分地上茎和地下茎两部分。土豆是中国五大主食之一，其营养价值高、适应力强、产量大，是全球第三大重要的粮食作物，仅次于小麦和玉米。土豆是块茎繁殖，可入药，性平味甘，可以治胃痛、痄肋、痈肿等疾病。作为食物，其保存周期不宜太长，一定要低温、干燥、密闭保存。(注：幼芽有轻微毒性） 致毒成分为茄碱（C45H73O15N），又称马铃薯毒素，是一种弱碱性的甙生物碱，又名龙葵甙，可溶于水，遇醋酸极易分解，高热、煮透亦能解毒。龙葵素具有腐蚀性、溶血性、并对运动中枢及呼吸中枢有麻痹作用。每100g马铃薯含龙葵甙仅5～10mg；未成熟、青紫皮的马铃薯或发芽马铃薯含龙葵甙增至25～60mg，甚至高达430mg。茄碱不是单一成分，用色谱法可分出6种生物碱：α-茄碱、β-茄碱、γ-茄碱以及少量的α-查茄碱（α-Chaconine）、β-查茄碱和γ-查茄碱。其中α-茄碱是主要成分。易溶于热乙醇，几乎不溶于乙醚、氯仿和水。熔点约285（分解）。比旋光度[α]D20 －60°（吡啶中）。发芽马铃薯中毒通常发生在食用后数十分钟至数小时，先有咽喉及口内刺痒或灼热感，上腹部灼烧感或疼痛，然后出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状；还可出现头晕、头痛、呼吸困难。重者因剧烈呕吐、腹泻而导致脱水、电解质紊乱、血压下降；严重中毒者可出现昏迷及抽搐，最终因呼吸中枢麻痹而导致死亡。 1.1试验材料 马铃薯:取适量马铃薯，发芽处理。洗净，组织捣碎机捣碎，混匀。60℃烘干，植物样品粉碎机粉碎，备用龙葵碱标准品:a一茄碱，购于sigma公司，纯度)99.8% 1.2仪器与试剂 95%乙醇: AR，GB679一94 1%硫酸:量取5.65ml浓硫酸，缓缓注入冷水中，于I000ml容量瓶中定容，摇匀 1%甲醛: 量取25ml的甲醛，加入冷水中，于1000ml容量瓶中定容，摇匀 浓氨水: AR，GB631一89 1%氦水: 量取45.5ml的浓氨水，加入冷水中，于1000ml容量瓶中定容，摇匀 浓硫酸: AR 冰乙酸: AR，GB676一90 仪器：磁力搅拌器、水浴锅、索氏脂肪提取器、贝克曼分光光度计、圆底烧瓶、直形冷凝管、电子天平(2009，0.lmg)、组织捣碎机、植物样品微粒粉碎机。 2.提取分离方法 乙醇法:称取209的马铃薯鲜样品，将样品和几个玻璃珠(防止加热沸腾)放置于250ml的圆底烧瓶中，添加100ml的95%乙醇，将圆形烧瓶连接直形冷凝管，放置于水浴锅，调节温度为85一95℃，水浴4个小时。冷却，过滤取滤液，回收乙醇近干，然后将剩余的乙醇倒入蒸发皿中，将乙醇蒸干。用30ml的5%硫酸溶解剩余物，过滤，收取滤液，加入浓氨水调节PH值为10一10.5，冷却，放置于冰箱过夜。4℃，5000r/min离心，去上清液，用l%氨水洗涤，再离心，洗涤，至洗涤液澄清，离心，取沉淀即得粗样品。 乙醇一乙酸法:称取2鲍的烘干马铃薯鲜样品，加100ml乙醇和3ml乙酸，磁力搅拌器搅拌15分钟，过滤。滤液装入索氏脂肪抽提器的称脂瓶，滤渣用滤纸包住，放入索氏脂肪提取器的滤纸筒内，水浴抽提16小时后，回收乙醇近干，然后将剩余的乙醇倒入蒸发皿中，将乙醇蒸干。用30ml的5%硫酸溶解剩余物，过滤，收取滤液，加入浓氨水调节pH值为10~10.5，冷却，放置于冰箱过夜。4℃，5000r/min离心，去上清液，用1%氨水洗涤，再离心，洗涤，至洗涤液澄清，离心，取沉淀即得粗样品。 3.测定方法 龙葵碱标准溶液:精确称取0.0500g龙葵碱，加入l%硫酸溶液溶解，移入50ml容量瓶中，加入1%硫酸溶液至刻度，摇匀。此溶液每ml含龙葵碱lmg。标准曲线的制作:取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准溶液以1%硫酸稀释到2ml，置冰浴中逐渐加入5ml硫酸(宜于3分钟以上时间滴完)，放置1分钟，然后置冰浴中滴加2.5ml l%甲醛(在2分钟以上时间滴完)，放置90分钟后，于520nm波长测定吸光度。 样品的测定:将提取的粗样品用l%硫酸溶解，定容到10ml。取2ml的样品溶液，与标准曲线的制备同样操作，先预测其大概浓度，再以1%硫酸调节样品浓度，使之每毫升在0.2mg以下，取2ml按标准曲线制备项下操作，于520nm波长测定吸光度，计算含量。 4.马铃薯中龙葵碱含量的计算公式 X（mg/100g）=（P*V*50）/m 式中X—100g样品中所含龙葵碱的量 P—测定结果相应的标准浓度（m