硫代葡萄糖苷的检测.doc

硫代葡萄糖苷的检测 1 硫代葡萄糖苷的简介 硫代葡萄糖苷 ( 以下简称硫苷）是主要分布于十字花科和刺山柑植物中的含硫次生代谢产物。由 β- D- 硫葡萄糖基、硫化肟基团和来源于氨基酸的可变侧链 R 组成。 其生物合成途径分为三部分：前体氨基酸侧链延伸、核心结构形成及次级侧链的修饰。硫苷以稳定化合物的形式分布于植物营养器官和生殖器官中，当植物组织受到破坏时，分布于细胞质的黑芥子酶将液泡中的硫苷分解成腈、异硫氰酸酯、硫氰酸酯、恶唑烷酮等多种降解产物，反应产物因硫苷种类、金属离子、pH 值等而不同，其过程十分复杂。 2 硫苷生理功能 2.1增强植物抗逆性 硫苷及其降解产物具有抵御草食动物、抗病虫及抗病原微生物能力，在植物的防卫反应中发挥重要的作用。硫苷降解产物烯丙基异硫氰酸酯、2- 苯乙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯及 1-氰基 - 2- 苯乙烷对芸苔属专食性昆虫卵具有致死作用。其中 2- 苯乙基异硫氰酸酯致死剂量最低，烯丙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯次之，1- 氰基 - 2- 苯乙烷最高。 较适应寄主植物中异硫氰酸酯含量比适应寄主植物高，因而可推测硫苷组成及浓度对专食性昆虫有影响。异硫氰酸酯对土传病虫害防治效果因其含量、病虫对其敏感性，在土壤中的释放速率及残留时间等而不同。当植株中 2- 苯乙基硫苷含量增加时，蚜虫数量减少，植株抗虫性增强。 2.2诱虫作用 硫苷是黄曲条跳甲进行寄主选择的主要因素，同一蔬菜品种中硫苷含量与其选择性呈显著相关。除此之外，硫苷还能刺激小菜蛾产卵，其产卵量与硫苷含量变化趋势基本相符。因而，硫苷具有诱虫作用。 2.3致甲状腺肿大 硫苷是菜籽饼中最主要的抗营养因子，其降解产物异硫酸氰盐及恶唑烷酮能够引起畜禽甲状腺肿大，并且甲状腺受损存在种间差异。 2.4抗癌 吲哚族硫苷降解产物对 S180 小鼠具有抗肿瘤作用。葡萄糖莱菔子苷（硫苷中一种）降解产物萝卜硫素是蔬菜抗癌效果最好的植物活性物质，诱导人或动物体内 Phase酶 II (如谷光苷肽 - S- 转移酶、苯醌还原酶和UDP- 葡萄糖醛酸转移酶)数量的增加，抑制 Pha-seI 酶的产生，从而阻断致癌物产生的代谢途径，抑制癌细胞分裂和生长。 3 检测方法： 原子吸收法 本法可测定umol/g量的硫代荀萄糖普。重量法、容量法、侧葡萄糖法、氯化肥法气相色谱法和液相色谱法.这些方法有的操作繁复，费时，所需样品量大，再现性差，有的需要昂贵的酶试剂，而各种方法的结果又难以比较，正如Uppstrom[”在1985年国际油菜分析化学讨论会上指出的有关硫普总量的测定，需要解决的问题很多.将欲测的有机物直接(或将其转化为某种化合物后)与金属离子反应，再用原子吸收法测定反应产物中(或未反应的)过量金属离子，即可求得有机物的含量.这种方法既可扩大原子吸收法的应用范围，又可解决一些有机分析方法要用纯有机化合物做标准的困难.本文用这种方法测定了油菜籽中硫代葡萄搪普(以下简称硫普).硫普分子虽然复杂，但经酶解后，均能无例外地定量产生等摩尔的H2SO4，而测定so4-目前一般被认为是较可靠的方法，因此若用巳知量的钡离子溶液与其反应，然后用原子吸收法测量过量的钡离子，即可间接求得硫普的含量。 实验部分： 1仪器与试剂 zeeman原子吸收分光光度计，离心机，超级恒温槽.0.01000mol/L钡标准溶液:称取l.9734gBaCo:溶于20mL2mol/L的HCI中，用水稀释至IL，用时再稀释为1.00mmol/L.0.0l000mol/LSO三一标准溶液:称取1.4204gNa:50。溶于少量水中，再稀释成1L,用时再稀释成1.00mmo1/L.油菜籽:江苏省农科院经作所提供. 2工作条件 用单纯型方法选定的最佳测定条件如下.波长:553.6nm，狭缝:1.3nm，灯电流:20mA，燃烧器高度7mm，乙炔流量2.5L/min. 3分析步骤 将一定体积含so4近中性试样溶液，移入已校正过的l0mL离心管中，加入2.00mLI.00mmol/L的Ba离子标准溶液，沸水浴5min，取出冷至室温，用水稀释至4.OmL，摇匀，在3500rPm.下离心lmin，用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子. 4样品分析 4.1工作曲线 往预先校正过的10mL离心试管中，分别加入1.00mol/L的so42-标准溶液。0.00、0.40、0.80、1.20、l.60mL，再分别加入2.00mL的l.00mmol/L的Ba离子标准溶液，摇匀、沸水浴5min，取出冷至室温。用水稀释至4.00mL，摇匀，在3500rPm下离心lmin.用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子. 5结果和讨论 5.1酸度试验结果表明，pH值为4一8时对测定无影响，故试样的测定酸度为pH5、7。 5.2加.热时间为改善BaSO4的