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诱导多功能干细胞问题的研究进展

诱导多功能干细胞问题的研究进展基科33 阮志远 2013012342前言:干细胞是一类具有自我更新能力、多向分化潜能的未分化成熟的细胞[1]。干细胞的这两个特性使得其在临床上有广泛的应用前景。研究表明,胚胎干细胞在治疗脊髓损伤、糖尿病、镰刀形贫血症等一系列疾病有重要的应用价值。然而,由于胚胎干细胞移植存在技术、伦理、免疫排斥等诸多限制,有关胚胎干细胞的研究及应用受到较大管制。因此,寻找一类与胚胎干细胞具有类似功能的细胞成了干细胞领域的一个重要研究方向。科学家们经过长期的研究发现,通过特定条件可以将成熟体细胞逆分化成具有再分化潜能的干细胞,即诱导多功能干细胞(IPSCs).毫无疑问,这项技术的实现使得干细胞医学应用焕发了新气象。下面就IPCS技术的最新发展及应用进行综述。IPSCs的研究背景研究表明,胚胎干细胞在细胞替代,组织修复,器官再生,基因治疗等多个方面有广泛的应用,但由于胚胎干细胞的的研究存有诸多限制,研究者们把目光聚集在了能否实现细胞逆转而使细胞具有干细胞的某些特性。自1952年Briggs和King率先成功培育出囊胚细胞核与去核卵母细胞融合而成的克隆胚胎以来,经过半个多世纪的探索,科学家们已经充分证明已分化的细胞的可逆转性。然而,传统的体细胞重编程技术,如体细胞核移植存在着效率低下及不可避免的伦理问题,寻找新型的技术对于研究者们而言势在必行。随后,一种以转化因子直接对细胞核的重编程(通过这种方法获得的干细胞即为IPSCs)开始进入研究者们的视野并逐渐成为研究热点。2. IPSCs的研究进展2.1.IPSCs的研究过程(以Yamanaka的工作为例)[2]首先,通过筛选,Yamanaka小组将目光投向24种特异性基因,并进行相应的检测。接着,Yamanaka小组设计了在小鼠Fbx15基因处插入一段βgeo基因卡带(该基因的表达能对G418产生抗性),而Fbx15在胚胎干细胞当中才能表达的特性使得只有成功诱导的细胞才能G418(一种新霉素类似物)的培养基具备抗性,未诱导成功的体细胞因无法再G418培养基上生存从而被淘汰。然后,按照这种筛选方式,Yamanaka小组将24种候选因子通过逆转录病毒转入小鼠的MEF上并进行检测。通过依次剔除一个候选因子来检测剩余因子能否继续维持细胞抗性来确定该因子是否为诱导必需因子的方法,最终,Yamanaka小组确定了诱导MEF重编程的“必需转化因子”组合,即Oct3/4、Klf4、Sox2和c-Myc。紧接着,Yamanaka小组对G418培养基上的抗性细胞群进行干细胞特性的验证。他们利用了RT-PCR、染色质免疫共沉淀技术、端粒酶活性测定、DNA芯片、诱导畸胎瘤形成等多种方法发现[3], IPSCs在细胞外型和生长特征上面与ESC非常相似,基因表达谱也高度类似,除了少量基因表达的差异。和ESC相同,IPSCs一样也具有分化成早期胚胎三个胚层的能力,也能产生嵌合体小鼠并产生生殖细胞。同时,两者在基因组水平的甲基化程度也是相同的。至此,IPSCs正式诞生。2.2.IPSCs的最新发展:近几年来,关于IPSCs的研究呈现出蓬勃生长的发展趋势,各类相关研究接踵而至,更有甚者取得了突破性的进展[1]。①物种选择:由最初Yamanaka所做的小鼠和人的基础之上,研究者们又做了关于猪、恒河猴、大鼠的IPCSs,不过很多还未形成嵌合体。②细胞种类:被用于重编程的研究的供体细胞有成纤维细胞、肾上腺细胞、肌细胞、造血系细胞、肠上皮细胞等。由此可见,用于诱导形成IPSCs的细胞种类繁多。但最近日本东北大学教授出泽真理提出,只有皮肤细胞内的特定细胞才可发育为IPS细胞。他的研究小组发现,如果只提取“Muse细胞”(存在于人体皮肤的纤维母细胞中)将其置于IPCSs培养基上,能获得比传统方法更多的IPCSs细胞,但如果使用纤维母细胞中的其他细胞,却完全没有得到IPCSs细胞。基于这个实验事实,他们假设能够成为IPCSs的供体细胞可能就是存在于特定皮肤组织中的一种干细胞,也就是他们宣称的新型干细胞“Muse”细胞。③因子导入途径:基因导入的方式按照转入因子是否与宿主基因整合重组大致可以分为两种:整合型与非整合型[4]。早期使用的包括逆转录病毒、慢病毒在内的一系列病毒载体将外源基因序列随机整合到基因组中,存在诱发肿瘤和宿主细胞基因表达异常的风险。虽然后来有科学家使用转座子技术[5](该序列在接入转化因子以后形成重组转位子插入细胞染色体以后通过转位子酶的瞬时表达而将先前导入基因切除)可以有效避免载体本身的基因对宿主基因的侵染,但依旧无法解决整合对宿主细胞带来不可控的影响。随后,各国科学家们陆续报道了非整合型载体介导的方法,如微环、附加体、质粒和蛋白质[6]等(非整合型载体的成功诱导表明外源基因只是重编程的启动因子,无

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