课题学习小结.docVIP

老师你好：最近我查阅了相关文献，学习到了很多相关的知识，简单的做个总结向您汇报一下。 TGF超家族包括TGFs、活化素、抑制素、骨形态发生蛋白(BMP)、穆勒抑制物等。TGF-β超家族中至少有6个结构相关因子(TGF-β1--6)。在人和其他哺乳动物中只存在有TGF-β1,2,3三种,其中TGF-β1是目前公认的最强的致肝纤维化细胞因子之一。 体内多种细胞均可合成分泌TGF-β,而在肝脏,它主要由激活的枯否细胞、肝星状细胞、内皮细胞、血小板、巨噬细胞、肝窦内皮细胞表达。有学者认为,成纤维细胞和肝细胞可能是肝纤维化过程中TGF-β1 的主要来源。 TGF-β受体(TβR) 有3类: TβRⅠ、TβRⅡ、TβRⅢ。只有Ⅰ、Ⅱ类受体是TGF-β信号通路必须的,它们都是跨膜糖蛋白。 只有TβRⅠ、TβRⅡ在细胞膜表面共同表达, TβRⅡ先与TGF-β配体结合,随后TβRⅠ识别并结合形成TβRⅡ—配体—TβRⅠ稳定的异源三聚体, TβRⅡ的丝/苏氨酸激酶使TβRⅠ的GS区丝/苏氨酸残基磷酸化,磷酸化的TβRⅠ再将信号放大并进一步传递给TGF-β反应的下游底物。 Smads蛋白是TGF-β信号传导过程中最重要的胞内效应因子,是目前所知的细胞内惟一的TGF-β受体激酶的底物,它能将TGF-β信号由胞膜转入核内。Smads与TGF-β膜受体作用并被磷酸化激活后,可进入细胞核内调控目的基因的转录表达。典型的Smads 蛋白由3部分组成,氨基端和羧基端高度保守的MH1和MH2结构域,和其间富含脯氨酸的间隔区。根据其结构和功能的不同分为三类:R-Smads包括Smad1、2、3、5和Smad8 ;Co-Smads包括Smad4/DPC4; I-smads包括Smad6、Smad7。其中Smad2、3、4、7参与TGF-β的信号转导。 TGF-β1信号进入细胞浆后使Smad3和Smad2磷酸化，与Smad4形成多聚物，随后Smads复合物易位至细胞核，在核内激活TGF-β1反应性基因的转录。Smad 2，3为受体调节Smad，Smad 7抑制受体调节Smad的信号传导，Smad4是受体调节Smad传导信号的伴侣。 Smad3siRNA能抑制内源性Smad3的表达而防止Smad3的核定位。不仅能抑制TGF-β1的抗增殖活性,而且抑制TGF-β1引起的促增生作用。有研究发现,siRNA2Smad3阻碍内源性TGF-β/Smad3信号转导后,能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖 ,并能诱导大量细胞凋亡,同时促进细胞表达MMP-3 蛋白。用基因沉默方法干扰Smad3在TGF-β/Smads信号通路中的传导作用可以减少纤维化。siRNA阻断TGF-β1可能成为肝纤维化的潜在治疗手段。 现在公认的Smad3 结合位点主要为CAGAC（C／A）或者是其互补序列（T／G）GTCTG，称之为Smad结合元件－SBE。Smad3 需要C－末端被Ⅰ型受体磷酸化或者去除MH2 结构域对MH1 的掩盖作用，从而与SBE相结合。研究证实，SBE的回文结构是Smad3的最适DNA结合序列，即为5＇－AGACGTCT－3＇。通过分析人DMP1基因启动子区的序列特性后发现，－209～－201bp区GTCTAGTCA 序列最有可能是Smad3的结合位点。因此，针对这个特殊的片段设计了寡核苷酸探针以及其突变探针。 然而，在不同细胞系中TGF-β1 既具有促进增殖又有抑制增殖的双向调节作用，甚至在同一种细胞中TGF-β1 也可表现出这种双向调节，即在高浓度时抑制细胞增殖，在低浓度时促进细胞增殖。大剂量TGF-β1 是通过作用于Smad3，促进其活性，进而引起细胞增殖抑制作用，小剂量TGF-β1使Smad3 结合活性降低而细胞增殖提高，而结合Smad3干扰后，小剂量抑制Smad3结合活性和促进细胞增殖却显著减弱了。 刘毅师姐研究认为IGFBP7（rP1）可以激活体外培养的HSC，并且可使ECM的重要组成成分CollagenⅠ和FN的合成与分泌增加。张骞骞师姐研究认为IGFBp7(rp1)在TGFβ1诱导的HSC-T6中表达明显增强。而且IGFBp7(rpl)与CollagenⅠ呈正相关关系。 IGFBP7可以抑制肿瘤生长，机制可能是IGFBP7 mRNA的表达与其启动子甲基化状态有关，若启动子发生甲基化则抑制该基因的表达。 我学习到的主要内容有： 1、TGFβ1与Smad3的主要作用以及TGF-β/Smad信号通路在肝纤维化中的作用。 2、RNA干扰及基因沉默的原理及技术，以及在肝纤维化研究中的应用。 3、TGFβ1既促增殖又抑制增殖的双向调节作用。这是以前没有学习到的，这种作用可能与剂量有关。 4、IGFBP7在肝纤维化领域研究的很少，文献资料主要是咱科研中心发表的。师姐们的研