第十一章固相膜免疫技术讲述.ppt

* * * 斑点金免疫层析试验(DICA) 是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫技术，与斑点金免疫渗滤试验的过滤性能不同，DICA是滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判断实验结果。 层析试纸条结构示意图 双抗体夹心法（大分子抗原） 　　A、B都为吸水材料，C为金标抗体干片，T区包被特异性抗体，R区包被抗小鼠IgG（抗金标抗体） 检测操作步骤 3.. 双抗体夹心法结果判断 竞争法（小分子抗原） A、B为吸水纸 G 金标抗原 T标准抗原　C金标抗抗体 竞争法结果判断 阴性 阳性 无效 间接法（测抗体） 双抗原夹心法（测抗体） A、B为吸水纸 G 金标抗原 T标准抗原　C针对抗原的抗体 （三）临床应用及评价 优点：本法操作简单、快捷以及操作人员不需技术培训，无需仪器设备试剂稳定，便于保存，已成为“床旁检验”的主要方法之一。 缺点：只能定性不能定量，且灵敏度不如酶标法和酶发光免疫测定。 因此金免疫技术在临床上常用于快速筛查试验。 第二节 其他膜载体免疫分析技术 一、斑点酶免疫吸附试验（Dot-ELISA） 该试验与常规的ELISA相同，不同之处在于斑点-ELISA所用载体为对蛋白质具有极强吸附力（100%）的硝酸纤维素膜，此外酶作用底物后形成有色的沉淀物，使膜染色。 Dot-ELISA 原理示意图 Dot-ELISA 技术要点和方法学评价 技术要点： 抗原包被膜、抗原抗体反应、显色反应 方法学评价： 灵敏度高、试剂用量少、 操作简单、结果易保存。 二、免疫印迹试验 　　免疫印迹试验（IBT）亦称酶联免疫电转移印迹法，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容量大、灵敏度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。 IBT 原理示意图 IBT 技术要点和方法学评价 技术要点： SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳、电转移、酶免疫定位。 方法学评价： 抗体性质影响大、需要辅助方法提高灵敏度、临床应用中存在局限性。 本章小结 1.固相膜免疫测定与ELISA相类似，其以微孔膜作为固相。 2.固相膜免疫分析技术有多种方法学类型，但以斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验为代表，且为临床最常用的快速检测方法。 3.固相膜免疫分析技术本质上与其他免疫学标记技术无异，都是通过标记特定的抗原或抗体来检测标本中的抗体或抗原，而该技术是以胶体金作为示踪物或显色剂，最终通过显色达到检测目的。 * * 固相膜免疫与ELISA相类似，其特点是以微孔膜作为固相。固相膜的特点在于其多孔性。非共价键高度吸附抗体或抗原和易于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上面向前移动。 * * * * * * * * * * * * 临 床 免 疫 学 检 验 临 床 免 疫 学 检 验 临 床 免 疫 学 检 验 临 床 免 疫 学 检 验 临 床 免 疫 学 检 验 临 床 免 疫 学 检 验 固相膜免疫分析技术 第十一章 【学习内容】 第一节 胶体金免疫技术 胶体金与免疫金的制备 胶体金免疫技术的方法学种类与原理 第二节 其他膜载体免疫分析技术 斑点酶免疫吸附试验 免疫印迹试验 【学习目的】 【问题导读】 概　述 固相膜免疫分析技术 (solid phase membrane-based immunoassay) 以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可以通过毛细血管作用在膜上向前移行的特性，以酶标记或各种有色微粒子标记抗体或抗原作为标记物，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。 固相膜免疫分析技术 其他膜载体免疫分析技术 胶体金免疫技术 斑点酶免疫吸附试验 免疫印迹试验 斑点金免疫渗滤试验 斑点金免疫层析试验 技术类型 第一节 胶体金免疫技术 胶体金免疫技术(colloidal goldimmunoassay)：　　　　　　是一种以胶体金作为标记物，用于抗原抗体反应来检测抗原或抗体的免疫标记技术。 　 现该技术广泛应用于急诊医学、输血医学、现场诊断及个体自我体检等方面，且简便、快速、安全，其主要模式有斑点金免疫渗滤和层析试验。 一、 胶体金与免疫金的制备 胶体金(colloida