柱色谱分离快与速柱层析探讨.pptVIP

柱色谱分离及快速柱层析色谱 Column Chromatographic Separation Flash Chromatography;化学分离工程（化学工程二级学科）;色谱分离法分类;色谱流出曲线;从色谱流出曲线中，可得许多重要信息： (1) 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含 组分的最少个数； (2) 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析； (3) 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析； (4) 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据； (5) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。;色谱分离中的重要参数;色谱分离的热力学性质;塔板理论;理论塔板高度越低，在单位长度色谱柱中就有越高的塔板数，则分离效果就越好。 决定理论塔板高度的因素有：固定相的材质、色谱柱的均匀程度、流动相的理化性质以及流动相的流速等。 塔板理论是基于热力学近似的理论，在真实的色谱柱中并不存在一片片相互隔离的塔板，也不能完全满足塔板理论的前提假设。 塔板理论虽然能很好地解释色谱峰的峰型、峰高，客观地评价色谱柱地柱效，却不能很好地解释与动力学过程相关的一些现象，如色谱峰峰型的变形、理论塔板数与流动相流速的关系等。 ;速率理论;速率理论;分子扩散项 B / u （纵向扩散项） 纵向分子扩散是由浓度梯度造成的。组分从柱入口加入，其浓度分布的构型呈“塞子”状。它随着流动相向前推进，由于存在浓度梯度，“塞子”必然自发的向前和向后扩散，造成谱带展宽。分子扩散项系数为 B = 2γ Dg γ-弯曲因子，填充柱γ 1 空心柱γ = 1 Dg-组分在流动相中的扩散系数 ;速率理论;快速柱层析色谱-Flash high-performance flash chromatography system;;Flash柱的选择及上样方式;Flash正相色谱Rf值与柱体积关系;Flash反相柱; 以Biotage LS为例，最大压力可达15bar，配备750g和1500g硅胶量的SNAP专用分离柱，最多一次可分离超过150g样品；流速最高达到500mL/min，只需30分钟就可以分离多达几十克样品。;Flash柱分离应用实例-1;前言 微囊藻素是由水华藻在淡水以及海洋环境???产生的一类肝毒素类环多肽结构。其通过抑制真核细胞的蛋白磷酸酶在细胞生长、蛋白合成、糖原代谢以及肌肉收缩等方面扮演重要角色。 高效薄层色谱与高电压纸电泳仅能实现微囊藻素微克级别的提纯。其难度在于微囊藻素仅占海藻细胞干重的0.7%，且其极性范围较大。 该工作使用反相flash柱从水华藻细胞中提纯克级的微囊藻素。;实验部分 （1）微囊藻素的萃取 浓缩的细胞浮渣物经过甲醇萃取、离心、萃取、旋干除溶剂得提取物。 提取物通过flash柱以提取物:甲醇:水（1:1:1.8）洗脱剂进行分离。 （2）浓缩、纯化微囊藻素 使用Biotage Flash 75 S system，压力为137.8×107 Pa，9×7.5 cm 色谱柱内装载两种固定相：球形Hyperprep C18或不规则Bondapak C18填料。 流速：100 ml/min。 甲醇浓度0 - 100% 梯度洗脱。 238 nm分光光度计检测。 HPLC进行纯度分析。 （ 3）去盐和浓缩 ;Flash柱分离应用实例-1;Flash柱分离应用实例-1;Flash柱分离应用实例-1;Flash柱分离应用实例-1;Flash fractions were pooled to give three main fractions which were analysed by reversed-phase HPLC with diode-array detection: (a) fraction 1 containing predominantly an uncharacterised microcystin (2); (b) fraction 2 contained predominantly MC-LR (5) and MC-LY (8); (c) fraction 3 contained hydrophobic microcystins 12, 13, 14 and 15 and an uncharacterised mi