如何用细胞增殖试剂WST1使报告基因分析标准化.pdfVIP

新技术与新方法 如何用细胞增殖试剂W ST 21 使报告基因分析标准化 　　将一个启动子序列与一个易检测的报告基因相 连是研究转染真核细胞基因的表达的常用方法。这 样报告基因如: 萤火虫荧光素酶, 大肠杆菌氯霉素乙 酰转移酶或大肠杆菌 Β2半乳糖甘酶。为了减少细胞 培养产生的变异, 就蛋白浓度或细胞数目而言, 各个 加样孔的结果必须是标准化的。同时检测细胞数的 量通常也作为细胞毒效应的指标。 近来大多数实验室通过蛋白质测定来进行标准 化分析, 这些测定由于需许多手工步骤 (标准曲线、 样本准备、稀释、资料处理)因而费事, 冗长, 不精确。 使用方便的W ST 21: 为了使你的实验更轻松, 这里介绍了一种简便便宜的报告基因测定标准化方 法, 它可以对细胞数量或细胞毒效应进行简单的测 量。细胞增值剂W ST 21 是即用型试剂, 它可以定量 监视细胞的代谢活性,W ST 21 转变成一种直接与细 胞数目相关的可溶性 fo rm azan 盐, 此法既不需要冲 洗也不需要细胞收获, 整个过程可以在细胞培养皿 中进行。另外与在线计算机相连的 ELA SA 平皿读 数器可以进行迅速和自动化的数据处理, 这对大量 样品分析有利。 如何应用W ST 21 测定: 1. 根据标准实验流程进行细胞培养和转染。 2. 细胞裂解前 30～ 120 分钟往细胞培养基中 加入 10% W ST 21 试剂