MicroRNA检测技术及其在神经系统疾病中研究进展.pdf

基金项目: 国家自然科学基金( ; 广东省职业病防治重 点实验室 ( 2012A061400007 ) ; 广东省自然科学基金 ( S2013010011816) ; 广东省医学科研基金( B2013020) 作者简介: 曾丽海( 1985—) ，女，卫生毒理学硕士，医师，主要从 事毒理学和职业卫生工作 通讯作者: 黄振烈主任技师，E-mail: huangzhenlie@ 126． com doi: 10． 11763 / j． issn． 2095-2619． 2014． 05． 022 ·综述· MicroＲNA 检测技术及其在神经系统疾病中 研究进展 Ｒesearch progress on test techniques for microＲNA and its roles in nervous system disease 曾丽海 1 ， 贾肖辉 2 ， 李道传 2 ， 黄振烈 1 ZENG Li-hai 1 ，JIA Xiao-hui 2 ，LI Dao-chuan 2 ，HUANG Zhen-lie 1 1． 广东省职业病防治院，广东省职业病防治重点实验室，广东 广州 510300; 2． 中山大学公共卫生学院，510080 关键词: microＲNA; 神经系统疾病; 检测技术; Northern 印记; 原位杂交; 实时反转录聚合酶链反应; 基因表达芯片 中图分类号: Ｒ446 文献标识码: A 文章编号: 2095 － 2619( 2014) 05 － 0582 － 05 MicroＲNA ( miＲNA ) 是 真 核 生 物 体 内 一 类 由 约 20 ～ 24个核苷酸组成的在进化上高度保守的内源性非 编码小 ＲNA 分子，几乎所有组织中都含有 miＲNA，其 参与体内不同的生命过程，从基因转录调节网络、发 育、神经突触形成、细胞的分化与死亡、病毒感染乃至 肿瘤的转移等［1 － 2］。神经系统疾病是包括脑血管病、 神经系统感染、神经系统肿瘤、神经系统退行性疾病 和神经系统自身免疫疾病等在内的一组多发性、系统 性疾病的统称。据统计，全球约 10 亿人患有各种神经 系统疾病，其所导致的总经济负担较重［3］。该类疾病 由于发病机制复杂，临床症状多样，造成其诊断与治 疗较为困难。近年来，学者们对 miＲNA 与神经系统疾 病的关系进行了广泛的研究，发现其在该类疾病如多 发性 硬 化 ( Multiple sclerosis，MS ) 、阿 尔 茨 海 默 病 ( Alzheimers disease，AD) 和神经胶质瘤的发生、发展 中发挥着重要作用［3 － 5］，从而为阐明该类疾病的发病 机制提供新的证据，也为其提供更好的诊断和治疗方 法。本文对 miＲNA 检测方法及其与神经系统疾病的 关系进行综述。 1 miＲNA 概述 miＲNA 广泛存在于动物、植物和病毒等多种有机 体中，在转录后水平上调控了至少 1 /3 的人类功能基 因。目前，Sanger 研究所整理和注释的 miＲNA 已达 2 万多 个，其 中 在 人 体 中 发 现 的 miＲNA 超 过 1 000 种［6］。miＲNA 具有以下几个明显的特征: ①miＲNA 大 小约 20 ～ 25 nt，有 5端磷酸基和 3羟基; ②miＲNA 不 编码蛋白质，不具有开放阅读框架，前体折叠形成茎 环或类似茎环的二级结构; ③成熟的 miＲNA 由剪切酶 加工而来，其序列及预测的发夹结构在不同物种间具 有高度的进化保守性; ④几乎所有的 miＲNA 都是从前 体的一条臂上切割而来; ⑤miＲNA 以单拷贝形式、多 拷贝形式或基因簇等形式存在于基因组; ⑥miＲNA 的 表达具有严格的时空性和组织特异性［7 － 8］。miＲNA 在不同的细胞系中发挥作用，调控不同的生物过程， 是很好的潜在监测疾病的生化指标。基因组 miＲNA 在 ＲNA 聚合酶Ⅱ的作用下转录成为初级 miＲNA，随 后在核内被核酸酶 Drosha 加工成长约 70 nt 的发夹状 miＲNA 前体( pre-miＲNA) ，经 Exportin5 蛋白转运到细 胞质中，pre-miＲNA 被核酸酶 Dicer 切割成双链 miＲ- NA，然后成熟的 miＲNA 分子被解链，而单链 miＲNA 在细胞质内与 Argonaute 蛋白等形成 ＲNA 诱导的沉默 复合体，通过与靶基因的 3非翻译端 3UTＲ 区互补配 对，指导复合体对靶基因 mＲNA 进行切割或抑制翻译 过程，从 而 对 靶 基 因 的 表 达 发 挥 转 录 后 调 控 的 作 用［9］。miＲNA 的作用是切割还是抑制取决于 miＲNA 与靶序列互补配对的程度，当互补配对高时进行切 割，从而导致基