生物与分子生物学复习 第36章RNA生物合成和加工15.pdfVIP

第36章 RNA生物合成和加工 Chapter 36 RNA Biosynthesis and Processing 遗传信息传递的中心法则 蛋白质 翻译 转录 逆转录 复制 复制 DNA RNA 内 容 第一节 DNA指导下RNA的合成 第二节 RNA转录后的加工 第三节 RNA指导下的RNA和DNA的合成 第一节 DNA指导下RNA的合成 ? 转录（transcription）：生物体以DNA为模板合 成RNA的过程，转录是通过DNA的指导下的RNA聚合酶 的催化实现的。经转录生成的RNA有多种，主要的是 rRNA，tRNA，mRNA，snRNA 和 scRNA。 ? 转录从DNA模板的特定位点开始，并在一定的位点 终止,此转录区域为一个转录单位。 ? 转录的起始是由DNA的启动子（promoter)控制 的，控制中止的部位称中止子（terminator)。 1. DNA指导的RNA聚合酶 反应式： n1ATP RNA polymerase n2GTP n3CTP DNA, Mg2+(or Mn2 +) n4TTP RNA +(n1+n2+n3+n4)PPi 从聚合反应的化学本质、极性和模板的使用这三方面来说，转录 与复制是相同的。但是，也存在三个主要不同点： ?转录中不需要RNA引物、以4种三磷酸核糖核苷（NTP）为底物； ?转录反应一般只用一小段DNA做模板； ?在转录区，一般都只有一条DNA链可以作为模板。 启动子 终止子 模板链（负链，反意义链） 编码链（正链，有意义链）非信息区 DNA 5′ 5′3′ 3′ 两股DNA单链中只有一股可转录,可作为模板转录成 RNA的一股称为模板链,对应的一股互补链称为编码 链。能转录出mRNA然后指导蛋白质合成的部分称为结 构基因。其余的DNA可能转录(rRNA,tRNA),也可能不 转录。 不对称转录:DNA分子上一股可转录,另一股不转录;模 板链并非永远在同一单链上。 大肠杆菌RNA聚合酶（456 kD) ? ? ?? ?? 核心酶(α2ββ?) 起始因子 α—— 酶的装配与启动子上游元件和活化因子结合 β β? ?—— 识别启动子，促进转录的起始 ?????? 全酶(α2ββ? ?) ? 2 Zn 结合核苷酸底物 催化磷酸二酯键形成 和模板DNA结合 催化中心 转录泡，17bp 杂交体，8bp 酶的移动方向 大肠杆菌RNA聚合酶进行的转录 RNA合成过程 起始 (pppG or pppA) 双链DNA 局部解开 磷酸二酯 键形成 终止阶段 解链区到达 基因终点 延长阶段 5? 3? ? RNA 启动子 （promoter) 终止子 (terminator) 5? ? RNA聚合酶 ? 5?? 3? 5? ? 3? 5? 5? 3? NusA 离开 识别 NusA 3-9 nt 大肠杆菌RNA聚合酶与DNA的相互作用 β:与DNA疏水作用 β?:与DNA静电作用 真核生物的RNA聚合酶 ?三种RNA聚合酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,它们专一地转录不同的 基因,其转录过程和产物各不相同。 ?三种RNA聚合酶对鹅膏覃碱的敏感性反应不同。 snRNA (U6), scRNA r5s-rRNA (5.8,18,28S rRNA) 2. 启动子和转录因子 启动子( promoter)是指RNA聚合酶识别、结合和 开始转录的一段DNA序列。 RNA聚合酶起始转录需要的 辅助因子（蛋白质）称为转录因子(transcriptional factor)。 利用足迹法(footprint)和DNA测序法可以确定启 动子的序列结构。 足迹法确定 启动子序列 — + Footprinting results of RNA polymerase binding to the Lac promoter. In this experiment the 5 end of the Non-template strand was Radioactively labeled. Lane C is a control in which the labeled DNA fragment were cleaved with a chemical reagent that produces more uniform banding pattern 大肠杆菌启动子共有序列 ×× A G T C TTGACA×××× ××××××××××××××TAT ××××××××××××××ATA AAT×××××× AACTGT×××