Stathin基因表达与.doc

Stathmin基因在Ⅱ期非小细胞肺癌中表达的意义 王小红1 江洪2, 周星明3 , 张谷4, 苏丹5 1浙江省胸部肿瘤(肺、食管)诊治技术研究重点实验室、浙江省肿瘤医院化疗科 2杭州市第一人民医院胸外科 3 浙江省肿瘤医院胸外科 4浙江省肿瘤医院病理科 5浙江省胸部肿瘤(肺、食管)诊治技术研究重点实验室 浙江 杭州 310022 通讯作者：江洪 男 硕士 副主任医师 杭州市第一人民医院胸外科 浙江省杭州市浣纱路261号 电话： 电子邮箱：hh110120@126.com [基金项目] 浙江省教育厅资助课题2007-01345 【摘要】目的：探讨Ⅱ期非小细胞肺癌(NSCLC)中Stathmin mRNA和蛋白表达与患者预后的关系。方法：单基因定量法检测已手术Ⅱ期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin mRNA表达，免疫组化法检测患者肿瘤组织中Stathmin蛋白表达水平,所有患者行NP方案化疗，统计学分析其表达水平与患者临床病理学特征之间的关系，并随访患者的无瘤生存时间（DFS）和总体生存时间（OS），统计学分析StathminmRNA和蛋白表达水平与患者的DFS、OS的关系。结果：Stathmin mRNA表达水平与患者的T分期、N分期显著相关，而与患者的年龄，病理类型均无显著相关性、Stathmin 蛋白表达水平与患者的年龄、病理类型、T分期、N分期均无显著相关性，Stathmin mRNA和蛋白表达水平与患者的OS，DFS均无显著相关性。结论：Ⅱ期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin表达水平不能作为预测患者预后指标。 【关键词】 肺肿瘤；Stathmin； 一、资料和方法： 1.临床标本及资料收集：所有标本均从本院标本库中筛选（所有入标本库患者均签定知情同意书，医院伦理委员会讨论通过）。术后病理按照2006年国际抗癌联盟（UICC）TNM分期标准进行分期，共筛选2007年9月-2010年6月经根治性手术切除的II期NSCLC患者73例。患者的临床特征如下：男性58例、女性15例；年龄≤60岁55例、60岁18例；肿瘤大小≤3厘米22例、3厘米51例；无淋巴结转移28例、有淋巴结转移45例；高-中分化53例、低分化20例；腺癌33例、鳞癌36例、其他病理类型4例。 2.辅助化疗：患者术后转至化疗科室进行长春瑞滨联合顺铂化疗，顺铂75mg/m2分三天给予，长春瑞滨 25mg/m2 第1、8天，以上方案每3周重复。其中1例患者因骨转移只进行2周期化疗，有4例患者第1周期在本院进行，余3个周期化疗当地进行，其余患者均在本院完成4个周期的化疗。 3、随访资料（DFS和3年生存率）的收集：均通过电话随访，由指定医生完成，每3个月1次。共随访70例，失访3例，随访率为95.89%，失访病例按截尾值处理。 4. mRNA的检测：用单基因定量（Quanti-Gene Assay）方法分别进行，由基因科技（上海）有限公司完成。步骤如下：先将3-5片的石蜡切片样本直接用200μL裂解液裂解完全消化后，室温12000r/min，离心半径9cm，离心取上清液，与反应系统的各试剂包括微珠和探针等混合，在54摄氏度600r/min的条件下过夜混合杂交，杂交后利用磁力洗去未杂交到微珠上的杂质。接着对捕捉到的RNA信号利用bDNA技术做级联放大，通过预放大，放大，标记探针在50℃600r/min的条件下分别作1h杂交，每一步杂交后都需要用洗涤液洗3次。最后做SAPE标记后利用Luminex 200读取基因表达数据。检测过程按文献[4] Eastham LL, Mills CN, Niles RM. PPARalpha/gamma expression and activity in mouseand human melanocytes and melanoma cells[J］. Pharm Res, 2008, 25(6):1327-1333. 的方法进行。检测Stathmin mRNA的寡核苷酸探针QuantiGene 2.0工具由Panomics公司设计并合成。HPRT1基因作为质量控制基因,每个样本均检测待检基因和HPRT1基因拷贝数。 5、 Stathmin的蛋白水平检测：采用免疫组化方法，由本院病理科完成，免疫组化试剂购自福州迈新公司。Stathmin，蛋白主要表达在细胞质中,阳性呈棕黄色，以内皮细胞为阳性对照。结果判断采用半定量法，即结合阳性细胞的染色强度和百分比来判定表达状态。染色强度：无色0分；浅黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。着色细胞比例着色细胞比例：无着色0分；＜5%为1分；6%~30%为2