植物組织中超氧物歧化酶活性的测定.pptVIP

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2017-04-10 发布于上海
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植物組织中超氧物歧化酶活性的测定.ppt

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植物組织中超氧物歧化酶活性的测定

植物组织中超氧物歧化酶活性的测定制作人：刘洪庆单位：植物生理学教研室一、实验目的掌握SOD酶活性测定方法。掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使用方法。二、实验原理因此光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。核黄素被氧化物质还原的核黄素氧氮蓝四唑蓝色的化合物（560nm） 2 + 2H+ H2O2 + O2 SOD 三、实验材料绿豆芽下胚轴四、实验步骤试剂（酶）用量(ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 130mmol/L Met溶液 750μmol/L NBT溶液 100μmol/L EDTA-Na2液 20μmol/L核黄素酶液蒸馏水 3 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.4 13mmol 75μmol 10μmol 2.0μmol 对照管加缓冲液代替酶液总体积 6.0 1、酶液提取 2、显色反应表1 各溶液加入量 3、SOD活性测定五、实验结果计算 SOD总活性 = 单位：酶单位/g鲜重表示； Ack―照光对照管的光密度值； AE—样品管的光密度值； V—样液总体积（ml）； a—测定时样品用量（ml）； W—样重（g）；六、思考题 1、在SOD测定中为什么设暗中和照光两个对照管？ 2、影响本实验准确性的主要因素是什么？应如何克服？