0快速柱色谱使用指南Flash Chromatography.pdf

警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适 的人员监管下才能进行。对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。 对于所提供的任何材料的内容或其执行情况， MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。法律提示 7.9. 快速柱色谱使用指南 综述： 快速柱色谱(Flash Column Chromatography)是一种快速而且（通常是）容易的分离复杂 混合物的方法。在 5.301 中，我们要进行相对较大量的快速柱色谱分离，分离约 1g 左右的 物质。色谱柱通常都比这根柱子小，你们中的一些人在进入研究室后会有这方面的实践体会。 柱色谱和薄层色谱的原理一样，但它可以用于制备量物质的分离。因为我们是用压缩空气将 溶剂推过柱子，故称其为快速柱色谱。这不仅使分离效果更好，并且可缩短过柱时间。 读物： 更加全面的描述，请参阅 LLP 第 205-214页。 制备和操作快速柱色谱： 1）确定干燥、不含溶剂的待分离混合物的重量。 2）用薄层色谱选取溶剂体系，使Rf的值处于 0.2～0.3 之间，但如果混合物复杂，这可 能不现实。在比较复杂的情况下，可能需要借助梯度洗脱的方式，简单地说，就是在纯 化洗脱的过程中不断提高溶剂的极性，该技术在后面有更加详尽的介绍。但是在薄层色 谱分析中，你必需确定哪种溶剂体系将会使不同的点样处于Rf在 0.2～0.3的范围之内。 3）确定用于样品上柱的方法。你可有三种选择：净试样法，溶液法或硅胶吸附法。 净试样法：如果样品是非粘性油状物，使用净试样法最为容易。你可以用一个长的 滴管过滤器将液体引入柱中，然后用预先确定的溶剂体系进行淋洗，把所有组分洗入柱 子中。 溶液法：净试样法有时可能会引起分离柱断层。因此，对于液体和固体，更为普遍 的方法是将样品溶于溶剂中，然后将溶液加入分离柱。最理想的状态是，混合物中所有 组分在该溶剂体系（通常是戊烷或己烷）中的Rf为 0。这在多数情况下是难以实现的， 所以可选用那种只移动混合物中一个化合物的溶剂，或者你可以简单地用所选择的洗脱 液。记住：后面两种选择对于难度较大的分离纯化是有风险的。 63 硅胶吸附法：最后一个技术是将化合物沉积（吸附）到硅胶上，这对部分液体和所 有固体都是有用的。注意：硅胶是酸性的，因此这一步骤将会破坏一些对酸敏感的化合 物，它们通常需要在硅胶柱上再生。首先，在一圆底烧瓶中将混合物溶解在二氯甲烷中， 加入硅胶（硅胶的质量大约是化合物质量的两倍）。在旋转蒸发仪上浓缩该溶液。注意： 硅胶是非常细的粉末，很容易被吸入旋转蒸发仪中。用玻璃毛塞住接头或泵的保护装置， 以防止固体被吸入泵中。快速转动亦可以避免这个问题的出现。当固体基本上干燥的时 候（当多数固体从容器壁上脱落，说明固体已经干燥），从旋转蒸发仪上卸下烧瓶，再 用真空泵将溶剂抽尽（假设混合物中没有易挥发性物质）。注意：用玻璃毛塞住真空泵 接头，否则你可能会发现硅胶（以及你的化合物）进入真空管并沉积在那里。一旦其完 全干燥之后（固体中再没有气泡产生），从真空系统中取下烧瓶，用干净的刮刀从壁上 刮下固体。现在，你可以简单地用粉末漏斗将这部份固体加到分离柱的顶端，然后用洗 脱液淋洗（每次 1.5mL）。 4）确定合适的硅胶和化合物的比例。对于简单的分离，通常要求两者的比例为 30~50： 1（重量比）；但对比较困难的分离，需要的比例高达 120：1。阅读 LLP上的相关材料， 并且和一些经验丰富的同事进行讨论，将对你解决这个难题大有裨益。 5) 选取合适的分离柱。你所需用的硅胶量决定了分离柱的尺寸。是使用短而粗还是长 而细的分离柱，迄今为止还没有定论。在 5.301中，我们认为短而粗的分离柱会有更好 的分离效果，但是这个结论可能会被你以后的一些同事所质疑。当你首次开始实验的时 候，最好的选柱方法是向实验室的同事了解：对给定的硅胶量，应选择怎样的分离柱！ 把结论记在笔记本上（这比测量分离柱的直径方便很多）。在 5.301 中，我们只用一种 型号的柱子，这就不存在什么选择问题了！ 64 6) 选取合适的收集用试管。这也是一个向有经验的同事们请教的好机会。但也有简单 的方法：将硅胶体积除以 4，然后选取能装下这个体积的试管就可以了。（200mL 的硅 胶对应于 50mL的组分） 7) 一旦你选定了分离柱，你需要堵住活塞底端以避免硅胶的流失。通常，用一小团棉 花或者玻璃毛加一根长棍或玻璃棒即可完成。 8) 在通风橱中填充分离柱。考虑到要用大量挥发性