第26章RNA生物合成和加工.ppt-楚雄师范学院.ppt

第二十六章 RNA生物合成和加工;遗传信息传递的 中心法则;第一节 DNA指导下RNA的合成; 转录是在 DNA的指导下的RNA聚合酶的催化下，按照碱基配对的原则，以四种核苷酸为原料合成一条与模板DNA互补的RNA 的过程。RNA的转录从DNA模板的特定位点开始，并在一定的位点终止。此转录区域为一个转录单位。;转录与DNA复制的异同 相同：要有模板，新链延伸方向5′→3′，碱基的加入严格遵循碱基配对原则。 相异：①复制需要引物，转录不需引物。 ②转录时，模板DNA的信息全保留，复制时模板信息是半保留。 ③转录时，RNA聚合酶只有5′→3′聚合作用，无5′→3′及3′→5′外切活性。;大肠杆菌RNA聚合酶的结构示意图;细菌的RNA聚合酶，其活性形式(全酶)为15S，由5种不同的多肽链构成，按分子量大小排列分别为β(155000)，β(151000)，σ(70000)，α(36500)和ω(11000)。每分子RNA聚合酶除有两个α亚基外，其余亚基均只有一个，故全酶为ββα2σω(450000) ;RNA聚合酶催化的反应;真核细胞中的RNA聚合酶;RNA聚合酶Ⅰ合成RNA的活性最显著。它位于核仁中，负责转录编码rRNA的基因(称rRNA)，而细胞内绝大部分RNA是rRNA。另一主要的酶是RNA聚合酶Ⅱ，它位于核浆中，负责核内不匀一RNA(hnRNA)的合成。而hnRNA是mRNA的前体。RNA聚合酶Ⅲ负责合成tRNA和许多小的核内RNAs。转录抑制剂常用来区分这三类酶的活性。其中最主要的是一种双环八肽──α-鹅膏蕈碱。在不论何种真核细胞中，RNA聚合酶Ⅱ的活性均可被低浓度的α-鹅膏蕈碱所迅速抑制，而聚合酶Ⅰ却不被抑制。聚合酶Ⅲ对α-鹅膏蕈碱的反应则不尽相同:在动物细胞中聚合酶Ⅲ可被高浓度α-鹅膏蕈碱所抑制，而在酵母和昆虫细胞中则不会被抑制。 ;粗制的RNA聚合酶都是大而复杂的蛋白质，分子量达500 KD或更多。其亚基组成亦很复杂:每个酶分子有两个大亚基(一般说，一个约200 KD，另一约140 KD)，还有10个以下的小亚基，每个分子量约为10-90 KD。三种酶中也有一些共同的亚基，所以可能是一个原始的酶在进化过程逐渐分化为在复杂的真核细胞中执行不同功能的三种酶。直到现在还不能用亚基来重建活性的酶分子，因此还难以提出确切的证据说明这些亚基是否真正都是酶分子的固有的组成部分，也不知道哪些亚基负责催化，哪些负责调节功能。 ;抑制剂;RNA合成过程;转录终止信号;不依赖ρ因子的终止子有两个特征: [1]DNA顺序有双重对称(dyad)，位于RNA3′端之前15-20核苷酸处； [2]DNA模板链中有一串约6个A，转录为RNA3′端的U。 双重对称的意义在于其转录本能形成发夹结构。体外实验显示，如果掺入其他碱基以阻止发夹形成时，终止即不发生。通常只要有一个核苷酸的改变破坏了规则的双螺旋的茎时，即可破坏终止子的功能。对终止子突变的分析亦显示DNA模板上多聚dA顺序的重要性。如将此序列中的一个碱基换掉，或除去部分序列(缺失)都可使终止子失活。 ;依赖ρ的终止子没有不依赖ρ的终止子特有的多聚dA序列，并且也不是都能形成稳定的发夹。现在还不清楚ρ因子的作用机制，但有几种可能性:[1]ρ因子在RNA的存在下能水解ATP，说明它能与新生RNA链结合，并可能应用ATP放出的能量将RNA链从酶和模板中释出。[2]ρ因子可能与RNA聚合酶结合。编码ρ因子的基因rho发生突变时产生的某些ρ蛋白质仅能在RNA聚合酶的β亚基也发生相应突变时才能有RNA合成的活性。[3]已知RNA聚合酶本身能识别DNA模板中依赖ρ的终止顺序，而ρ因子是在以后才发挥作用而释出RNA的。即使是在没有ρ时，RNA聚合酶也在依赖ρ的终止子处暂停，不过以后仍继续向前进。故有人认为，即使有一个很弱的发夹也可使RNA聚合酶停止前进。此时ρ因子即可与之结合而将聚合酶和RNA解离下来。所以ρ因子也是一种酶。 ;楚雄师范学院化学与生命科学系 范树国;5-CCCAGCCCGCCTAATGAGCGGGCTTTTTTTTGAACAAAA-3 3-GGGTCGGGCGGATTACTCGCCCGAAAAAAAACTTGTTTT-5 ? 5-CCCAGCCCGCCUAAUGAGCGGGCUUUUUUUU-OH3 ;σ因子的解离;虽然全酶与启动子的结合要比核心酶与任何DNA顺序的结合紧密得多，但对非启动子DNA的结合却可能并不如此。因此，σ因子能抑制RNA聚合酶与DNA的非特异性结合，促使酶分子沿着螺旋轻快地旅行，直到它很快找到合适的启动子序列。通过沿着DNA向着一个方向前进，全酶就可以比它在细胞内空间的三维方向中更快得多地找到启动子。 ;因为