全內反射荧光显微镜.pptVIP

全内反射荧光显微镜;发展历史;发展历史; 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。 ; 在细胞生物学方面，传统光学显微镜始终不能解决生物样本显微中的几个重要问题： 1.显微图像的信噪比不高； 2.光源对生物样本照射的损伤； 3.光学衍射所致的分辨极限（R ≥0. 61λ/nsinθ）： 传统的光学显微镜由于受到光瞳远场衍射效应的影响,存在分辨极限,瑞利将之归纳为R ≥0. 61λ/nsin(u/2) ,其中R为分辨力 ,λ为成像光波波长, nsin(u/2)为物透镜的数值孔径,即NA 值，u为孔径角,因此光学显微镜空间分辨极限～250 nm。; 近年来人们开发出了一系列光学显微镜。其中，全内反射荧光显微术(Total internal reflection fluorescence microscopy ,TIRFM)是近年来新兴的一种光学成像技术。;Hirsch field 完成了 第一个 全内反射 荧光实验;基本原理; 全内反射荧光显微术是利用全内反射产生的消逝波