《细胞与免疫学与原理》3讲稿.ppt

第三讲细胞工程及其应用; 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞的遗传特性和生物学特性，以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术。;第一节 细胞融合技术;动物方面 组装鼠 美国耶鲁大学教授马格特和彼德斯利用黑毛鼠，白毛鼠，黄毛鼠三种颜色的老鼠的受精卵组装成披着黄百黑三种颜色的老鼠。 绵山羊 英国和美国还组装成功了绵羊和山羊的嵌合体，培育出具有绵羊的卷曲浓密的长毛，山羊式的仰角的绵山羊，毛肉兼用。;植物方面 薯番茄和番茄薯 人们用马铃薯和番茄通过细胞融合获得杂种薯番茄和番茄薯 甘蓝型欧洲油菜 用甘蓝和白菜的细胞融合使两个物种的染色体组相加，人工合成了甘蓝型欧洲油菜。;微生物方面 苏云金杆菌能杀玉米螟，灭蚊球孢菌有杀蚊子的效能，科学家们将这两种菌的原生质体融合获得了既能灭蚊又能杀螟的新菌株。; 这些都是自然进化所不能出现的新品种，他主要是通过细胞融合技术来实现的。 细胞融合是细胞工程最基本的核心技术。 ;细胞融合（又称体细胞杂交）： 是指用自然或人工方法使两个或更多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。并使之分化再生、形成新物种或新品种的技术。 ; ;生物法——仙台病毒法;病毒诱导的细胞融合的过程 首先是细胞表面吸附许多病毒粒子。 接着是细胞发生凝集。 几分钟至几十分钟后，病毒粒子从细胞表面消失。 最后就在这个部位．邻接细胞的细胞膜融合，胞浆得以相互交流，最后形成融合细胞。;病毒诱导的动物细胞融合;病毒诱导的细胞融合的缺点 制备困难； 每批病毒融合效价差别比较大，实验的重复性差； 灭活不完全时，有病毒感染的危险。 融合率较低;化学法——PEG;聚乙二醇的作用机理 PEG的水溶性极强，在液相介质中，它的许多醚键带有微弱负电荷；在Ca2+参与下，PEG将带正电荷的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白，通过Ca2+桥连在—起，使细胞发生聚集、融合。; PEG的作用与细胞表面结构间形成离???键有关。 PEG可与水分子借氢键结合，在高浓度(50％)的PEG溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，由此引起细胞融合。 ;化学诱导法的特点 优点： 具有细胞融合的通用性；与病毒比较，容易制备和控制；活性稳定；使用方便。 缺点： 对细胞毒性很大；诱导产生杂交细胞的频率仍在很低水平；不能在显微镜下观察细胞的融合过程。;物理法——电融合诱导法;细 胞;细胞电穿孔;细胞电融合 ;电场诱导的细胞融合 主要优点：①融合率高，融合率是PEG的l00倍，对细胞伤害小。②操作简便、快速，装置精巧，方便简单，诱导过程可控制性强，重复性强。③因为是物理刺激，无残余毒性，可免去洗涤过程。④具有普遍性，可用于动物、植物和微生物等各类细胞。⑤可用显微镜或录像观察融合过程，探讨融合机理。 ;缺点： 目前电融合技术存在的主要问题是融合细胞存活率低。;1、利用基因定位绘制人类基因图;;2、利用杂交细胞生产活性物质 单克隆抗体工业的兴起就是利用B淋巴细胞被特异的抗原刺激后能应答而分泌特异的抗体的特点同骨髓瘤细胞的长命不死的特点两者融而为一。;推论： 可能利用胰脏细胞生产胰岛素，利用甲状腺细胞生产甲状腺素，利用垂体细胞生产生长激素、各种促性腺激素、催乳素以及各种神经激素等。还可以利用麝香腺细胞生产麝香。 ;3、生产实践方面的应用 （1）在生物医药上的应用 如：单克隆抗体的生产 （2）在微生物构建新菌株方面的应用 ; 原生质体融合也成了微生物育种的重要手段。乳糖发酵短杆菌和黄色短杆菌是两种重要的氨基酸生产菌，黄色短杆菌是赖氨酸高产菌株，但生长缓慢，发酵周期长，生产中易染菌，将它与生长快的乳糖发酵短杆菌融合，得到了新的赖氨酸生产菌，提高了对葡萄糖的转化率，发酵周期缩短4%。; 对酱油酿制来说，曲霉的蛋白酶对谷氨酸（味鲜）的产量有很大的影响。过去在改良和培育酱油曲霉菌种时，其主要目的是增加产酶能力，但由于产蛋白酶高的菌株产谷酰胺酶的能力低，而产谷酰胺酶高的菌株产蛋白酶的能力低。人们把高产谷酰胺酶和蛋白酶的两株菌原生质体融合，获得双高产的优良菌种。;（3）在水产动物遗传育种上的应用 科学家把大鳞副泥鳅同鳗尾泥鳅杂交培育了融合鱼。 将鲤鱼囊胚细胞与红鲫鱼卵融合，培育了融合鱼苗。这些融合鱼各具两对触须，形态类似鲤鱼。 ;（4）在植物新品种育种上的应用 萝卜和甘蓝、粉蓝烟草和郎氏烟草、番茄和马铃薯、烟草和大豆、甘蔗和高粱、芥菜和紫芸苦等，