高效液相色谱分析技术课件.pptVIP

高效液相色谱分析技术(HPLC); HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。;按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类： 分配色谱：—— 分配系数 亲和色谱：—— 亲和力 吸附色谱：—— 吸附力 离子交换色谱：—— 离子交换能力 凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻;分配色谱又可分为： 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。 用的最多，约占60～70％。 固定相又分为两类： ①一类是使用最多的微粒硅胶； ②另一类是使用较少的高分子微球 ; 优点是强度大、化学惰性、使用pH范围大 (pH=1～14)； 缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和 凝胶色谱。;微粒硅胶占所有柱填料的80％,它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。;按键合到微粒硅胶基质上的官能团可分为： ⑴正相柱：填料为极性，官能团为－CN、－NH2等 ⑵反相柱：填料为非极性，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。 ;流动相： 1.正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是： 正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇 2. 反相色谱最常用的流动相及其冲洗强度如下： H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜异丙醇＜四氢呋喃 最常用的流动相组成是：“甲醇—H2O”和“乙腈—H2O”，由于乙腈的剧毒性，通常优先考虑“甲醇—H2O”流动相。;流动相的选择原则是： ①样品易溶，且溶解度尽可能大 ②化学性质稳定，不损坏柱子 ③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收 ④粘度低，流动性好 ⑤易于从其中回收样品 ⑥无毒或低毒，易于操作 ⑦易于制成高纯度，即色谱纯 ⑧废液易处理，不污染环境;HPLC 的组成;HPLC出现故障可以从多方面入手;1.从压力变化判断（ Pressure）;现象;现象;现象;1.4压力不稳定; 基线漂移、噪声 峰形异常（前沿、拖尾、变宽、分叉、无峰、负峰、鬼峰） 保留时间变化;现象;现象;现象;2.2.1峰前沿;2.2.2 峰拖尾;2.2.3 峰展宽;2.2.4 峰分叉;2.2.5 无峰;2.2.6 负峰; ;现象;3. 从数据结果中分析;现象;现象;温度：10～30℃；相对湿度80％； 最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。;六通阀进样器的使用及保养 泵的保养 柱的保养 紫外灯的保养; 工作原理;手柄转动要快速：手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。;样品必须过滤，样品溶液均要用0.45(0.22)μm的滤膜过滤,防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。 进样结束冲洗进样器：通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。;泵的保养：;柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净 要注意流动相的脱气 避免使用高粘度的溶剂作为流动相 进样样品要提纯；严格控制进样量;每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱 若分析柱长期不使用，应用适当有机???剂保存并封闭;紫外灯的保养：;请选择内容