蛋白质结构测定的方法综述.pptVIP

　蛋白质空间结构国内外研究动态;预测蛋白质构象的理论方法;同源模型方法; 测定蛋白质构象的实验方法;一 溶液中蛋白质分子构象的研究方法: 利用各种光谱学方法测定不同条件下蛋白质溶液光谱性质的差异，来确定其构象，以及与功能的关系 （一）吸收光谱：用不同波长光照射蛋白，检测透光强度， 以吸光度A ~ 波长λ作图。常温，低温 蛋白质吸收来自两个部分： 可见光区(400-770nm)：来自配基，如Cytc Trp = 280nm 紫外区(200-400nm) ：蛋白本身 Tyr = 275nm Phe = 257nm 肽基团=190~225nm ;（二） 荧光光谱法 （fluorescence spectrum):;（三） 圆二色谱(CD) ; 光源? 自然光 单色器 单色光 起偏振器 平面偏光 电光调制器 左、右园偏振光 ?照射样品?记录 CD谱应用：游离aa 无圆二色性，所以 CD谱只与构象有关。 ;意义：核磁共振波谱技术是能够在原子分辨率下测定溶液中生物大分子三维结构的唯一方法 应用：( Ⅰ) 研究生物大分子及其复合物在溶液中的 三维结构和功能; ( Ⅱ) 研究动态的生物大分子之间以及与配基 的相互作用; ( Ⅲ) 研究生物大分子的动态行为; ( Ⅳ) 用固体核磁共振或液体核磁共振技术研 究膜蛋白的结构与功能; ( Ⅴ) 研究蛋白质折叠,折叠动力学; ( Ⅵ) 用于药物筛选与设计; ( Ⅶ) 研究代谢组学; ( Ⅷ) 研究活细胞中的蛋白质蛋白质相互作用; ( Ⅸ) 核磁成像用于认知科学研究.; ;NMR谱与分子结构的关系：;NMR类型： 1H-NMR；13C-NMR等 一维谱: 吸收峰强度对一个频率变量作图 多维谱（二维、三维） NMR技术在测定生物大分子结构方面的优点: ① 不破坏生物分子的结构 ② 能在溶液环境下测定大分子空间结构，测定结构更 接近生物分子的天然状态 ③ 能研究大分子内部的构象动力学 ④ 分辨率较高，是测定溶液中???分子构象的最佳的方 法，与X-光晶体衍射法互为补充 ;STM的工作原理：;扫描隧道显微镜的基本原理是将原子线度的极细探针和被研究物质的表面作为两个电极，当样品与针尖的距离非常接近 (通常小于1nm) 时，在外加电场的作用下，电子会穿过两个电极之间的势垒流向另一电极。; 结构分析用的是单色X-射线，其波长在1A数量级，相当于分子中原子之间的距离。 用于结构分析用的仪器是X-射线仪。由X-射线管、滤波器、高压系统（30-50KV)、真空系统(10-4-10-5 mmHg柱）和照相机组成。 工作原理：由X-射线管产生的各种波长的X-射线，经过滤波器（如镍片等）得到一定波长的单色X-射线。单色X-射线通过晶体，产生衍射线，用照相机记录下来，得到衍射图，然后，通过对衍射斑点的位置与强度的测定与计算，并参照化学分析的结果，就可确定晶体结构。即：光学-实像，通过FT转变。;1 基本知识: (1) X-射线：波长0.01~10nm的电磁波(单色X-ray 0.1~1nm) 高能电子(50kv)轰击Cu靶产生Cu X-ray（主要 ?=1.52A°）。最大分辨率 = ? /2；而原子间距离 为0.1nm，所以能分辨原子之间的相互关系。 （2）晶胞（unit cell）: * 晶体：离子晶体、原子晶体或分子晶体 * 晶胞：平面六面体所形成的重复单位 * 晶胞参数：包括a, b, c三个边长