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郜刚分子生物学教案 PAGE  PAGE 8 郜刚分子生物学教案 教学单元教案格式 9 第3章 转录（之转录后加工- RNA拼接2） 课程教案 授课题目：第3章 转录 转录后加工-小RNA-RNA拼接1 第四周 第二次课教学时数：2授课类型： eq \o\ac(□,√) 理论课 □ 实践课教学目的、要求： 理解：真核生物mRNA前体的加工的意义和特征、RNA编辑的意义 掌握：内含子剪接的一般特征 了解：内含子的主要类型 核酶的功能和意义 教学重点： 重点阐明：内含子的剪接方式，较为详细的过程 重点指出：三类内含子的间接方式和化学本质 教学难点： 绝对难点：内含子的剪接方式 相对难点：无教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授 视频演示 PPT演示 讨论。以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板??（黑板板书） 学生回答问题为辅：（如时间等条件许可的情况下）注：以下内容按实际需要进行取舍 要求有多媒体，因为信息量大，许多结构图需要媒体放映，效果才好 第9讲：之转录后加工-RNA拼接2 课程教案 教学内容及过程旁批教学内容与教学设计： 接上节课对RNA拼接尤其是mRNA内含子的剪接进行详细介绍。 multiple introns may be spliced differently in different circumstances, for example in different tissues 1.RNA剪接(RNA splicing) 一个基因的外显子和内含子共同转录在一条原初转录产物中，将内含子去除而把外显子连接起来形成成熟RNA分子的过程。 RNA拼接的一般特点 内含子的分类，找重点的四种。：酵母tRNA I类内含子 Ⅱ类内含子 核mRNA前体 ★ Ⅰ类内含子（group Ⅰ）：含有中部核心结构的 细胞器基因 核基因 ★ Ⅱ类内含子（group Ⅱ）：不含有中部核心结构 细胞器线粒体基因内 核基因 ★ Ⅲ类内含子 （group Ⅲ）：具有 GU－AG 特征的边界序列 核基因mRNA前体 ★ tRNA基因的内含子： 均位于 tRNA 的反密码环上 四种内含子的边界序列各有一定共同的特征 内含子类型5’拼接点内含子3’拼接点剪接方式化学本质tRNA类无保守序列富含AU无保守序列蛋白酶参与直接切割和连接I类U↓有可供识别的特异序列G↓自我剪接转脂反应II类↓GUGCGAU↓III（真核mRNA）↓GUAG↓或者AC↓剪接装置复杂 2. 酵母tRNA RNA splicing tRNA splicing完整过程 tRNA的拼接特点（酵母为例） 1、链的断裂和连接是两个独立的过程 2、tRNA的内含子均位于反密码环的3’端 长14~16bp，其中含一段与反密码环互补的序列 反密码环处形成一个与成熟tRNA不同的构象 3、拼接酶系识别的就是这个二级结构 3 第一类内含子的剪接 I类的内含子的拼接特点： 1．5’ 拼接点和3’ 拼接点U↓… …G ↓ 2．内含子自身形成明显的二级结构 3．拼接属于自我拼接 ，由内含子本身完成，因为其具有酶的作用 拼接过程： 1、游离G发动的转酯反应，G 的 3’-OH 攻击内含子的 5’拼接点 2、exon A 的3’-OH 攻击3’拼接点，同时释放线状的内含子,形成成熟RNA分子 ? 两次转酯反应是紧密偶联的 ? 释放出的内含子可继续进行转酯反应 而形成环状 四膜虫的 35SRNA 的内含子有自身催化的性质 即 将一处已有的磷酸二酯键转变成另一处新的磷酸二酯键，不需要额外的能量。因此： 内含子可以看作是 RNA重排酶（RNA rearrangease）或 RNA异构酶（RNA isomerase） 其中： 拼接反应中，“酶” 和底物是同一个分子，且反应后变成了不同的分子 4 第二类内含子的剪接 第二类内含子的拼接 GUAU类 自我剪接 1、拼接点序列结构特征 拼接过程 5 第三类内含子的剪接 真核mRNA类的内含子GUAG类的 拼接位点的特征： 拼接机制（Splicing mehanism ) SnRNA (or ScRNA) 与拼接点序列间存在互补区域并参与剪接, 形成拼接体( spliceosome)。 Spliceos