荧光法解决方案.ppt

荧光测量中所用的光源一般比紫外-可见分光光度计所使用的光源发光强度大，激发光源通常采用发射强度高的汞弧灯、氢灯或氙弧灯。氙弧灯产生强烈的连续辐射，其波长范围在220~700nm之间。 1.激发光源 在荧光光度计中使用滤光片充当单色器。大多数荧光分光光度计都采用光栅或棱镜单色器。一般有两个单色器，一是激发光单色器，其作用获得单色性较好的激发光，以激发样品产生荧光；另一是发射光单色器，其作用在于分出某一波长的荧光，以减少干扰。 2.单色器 荧光分析所用样品池需用低荧光、不吸收紫外线的石英材料制成，形状以正方形、长方形为宜，也有用圆形的 3.样品池 4.检测器 荧光的强度很弱，因此要求检测器有较高的灵敏度。荧光分光光度计一般采用灵敏度高的光电管或光电倍增管做光电转换元件，为了消除激发光对荧光测量的干扰，在仪器中，检测光路与激发光路相互垂直。 荧光分析法可用于对荧光物质进行定性和定量分析。荧光定性分析可采用直接比较法，即将试样与已知物质并列于紫外线下，根据他们所发出荧光的性质、颜色和强度，来鉴定他们是否含有同一荧光物质。但由于许多化合物几乎在同一波长下产生光致发光，所以荧光分析法很少用作定性分析。 目前荧光分析法主要用于对无机和有机化合物的定量分析。 荧光分析法应用 步骤： 1.配制不同浓度的标准 溶液 2.做F～C关系曲线 3.求得浓度 定量分析方法 1.校正曲线法 C F 校正曲线 注意：固定仪器和测定条件； 试样浓度在线性范围内 如果荧光物质的校正曲线通过零点，就可以在线性范围内用标准对照法测定含量。具体做法是：在相同的条件下，测定试样溶液和标准溶液的荧光强度的比值和标准溶液的浓度就可以试样中荧光物质的含量。 2.标准对照法 注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内 1.直接荧光法 主要依赖于待测元素与有机试剂组成能发荧光的配合物，通过检测配合物的荧光强度来测定该元素的含量。较常用荧光法分析的元素为铍、铝、硼、镓、硒、镁、锌、镉及某些稀土元素 2.间接荧光法 某些阴离子如F-、CN- 等，他们可以从某些不发荧光的金属有机 配合物中夺取金属离子，而释放出发荧光的配位体，从而测定这些阴离子的含量 无机化合物的分析 * * * * * * * * * 当某些物质分子被光照射时，会吸收某些波长的光，然后再发射出波长更长的光，当照射光停止时，发射光也随之消失，这种光致发射光叫做荧光。 荧光分析法就是利用荧光物质分子所发射的荧光的特性和强度来进行定性定量分析的方法。 分子荧光分析法（molecular fluorescene analysis,MFA）正在朝着高效、痕量、微观和自动化的方向发展，其灵敏度、准确度和选择性日益提高，应用范围工业、农业、医药卫生、环保、刑侦和科学研究领域。 1.基本概念 2.基本原理 E0是基态能级，E1是第一电子激发态能级； V是振动能级 无辐射跃迁不会发光：某些特定结构（如π-π共轭体系）的分子，当处于基态能级的分子吸收了一定频率的光，便被激发至其电子激发态能级的某个振动能级，然后通过相互碰撞或和其他分子（如溶剂分子）碰撞消耗振动能级间的能量，急剧降至第一电子激发态的最低振动能级 当第一电子激发态的最低振动能级继续下降至基态的各个不同的振动能级时，则以荧光的形式发出能量。较高的基态振动能级的分子在经过分子之间的碰撞失去部分能量回到最低基态振动能级。相对于基态和激发态两个最低振动能级之间的跃迁所产生的荧光称为共振荧光。 射线的频率ν、波长λ以及其光子的能量E、动量p之间存在如下关系： 式中: h——普朗克常数，等于6.626×10-34 J·s; c——光速，等于2.998× 1010cm/s. 在光致激发和去激发光中，价电子可以处在不同的自选状态，常用电子自旋状态的多重性来描述。 一个所有电子自旋都配对的分子的电子态称为单重态，用S表示，基态为单重态的分子具有最低电子能，用S0 表示如果电子在跃迁过程中改变了自旋方向，使分子具有两个自旋平行的电子，这样的电子态称为三重态，用T表示 基态 单重态S 三重态T E 当激发态分子返回基态时，如果不伴随发光现象，此过程称为无辐去激，它包括振动弛豫、内转换、系间窜跃 处于S1或T1态的分子返回S0态时伴随发光现象的过程称为辐射去激 分子荧光：分子从S1态或T1态的分子返回S0态各个振动能级所发生的辐射光称为荧光，他是相同多重态间的允许跃迁，其概率大，辐射过程快，一般在10-9~10-6 s内完成，因此也叫快速荧光或瞬时荧光。 分子磷光：当受激分子将至S1的最低振动能级后，经系间窜跃至T1态，并经T1态的最低振动能级回到S0态的各振动能级所辐射的光称为