Cry1Ac和sck双价抗虫基因遗传转化甘蔗的研究.pdf

甘蔗抗虫基因工程育种一直是甘蔗产业的重要 发展方向 ， 每年中国甘蔗产业因螟虫危害导致的损 失高达数十亿 ， 甚至上百亿元 ， 另外每年数十万吨 剧毒农药投入蔗田 ， 杀虫效果并不理想 ， 反而加重 了害虫的抗性 ， 并导致严重的环境污染和人畜中毒 事故[1] 。 近年来 ， 随着中国经济的发展 ， 农村人口 大量进入城市 ， 甘蔗产业生产方式也发生了改变 ， 为确保甘蔗产业的可持续发展和食糖安全 ， 迫切需 要利用基因工程技术培育和发展抗虫转基因甘蔗新 品种 。 利用基因工程技术将杀虫蛋白基因导入植物 中提高植物的抗虫性 ， 已成为当今植物基因工程的 研究热点之一 。 目前转基因甘蔗的技术已成熟 ， 已 有许多获得转基因植株的报道[2-8] 。 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 (Bacillus thuringiensis ， Bt) 对 鳞翅目 、 双翅目 、 鞘翅目等多种昆虫具有髙度特异 性 ， 是 目 前 应 用 最 广 泛 的 抗 虫 基 因 [9] 。 1997 年 ， Arencibia 等 [10-11]首次将经过修饰的 Cry1A(b) 基因导 入 甘 蔗 并 获 得 了 表 达 。 2006 年 Weng 等 [12]为 提 高 m-Cry1Ac 的表达 ， 对基因进行 了密码子 的改 造 ， 并将其 GC 含量提高到 47.5 ％ ， 在 Ubi 启动子驱动 下 导 入 甘 蔗 YT79-177 和 ROC16 ， 经 免 疫 分 析 确 定 ， 有 18 个转基因株系表达 ， 饲喂于甘蔗蛀茎虫 ， 1 周内全部死亡 ， 而对照品种的叶茎则遭受严重虫 害 。 之 后 Weng [13]再 次 将 GC 含 量 提 高 到 54.8 ％ ， 再一次提高了 Cry1Ac 基因的表达量 ， 达到了 2.2～ 50 ng/mg 。 冯翠莲等 [14-15]构建了 Cry1Ab 和 Cry1A （ c ） 基因的植物表达载体 ， 通过 农杆菌介导 法转化甘 蔗 ， 均获得了阳性植株 。 热带作物学报 2014 ， 35 （ 11 ）： 2236-2242 Chinese Journal of Tropical Crops 收稿日期 2014-05-20 修回日期 2014-09-30 基金项目 国家现代农业产业技术体系专项资金项目 （ No. CARS-20-1-1 ）。 作者简介 吴 转 娣 （ 1982 年 —）， 女 ， 助 理 研 究 员 ； 研 究 方 向 ： 甘 蔗 基 因 工 程 。 * 通 讯 作 者 （ Corresponding author ）： 吴 才文 （ WU Caiwen ）， E-mail: gksky_wcw@163.com 。 Cry1Ac 和 sck 双价抗虫基因遗传 转化甘蔗的研究 吴转娣 1 ， 吴才文 1 * ， 曾千春 2 ， 苏火生 1 ， 刘新龙 1 姚 丽 1 ， 张 敏 1 ， 刘家勇 1 1 云南省农业科学院甘蔗研究所 云南省甘蔗遗传改良重点实验室 云南开远 661699 2 云南农业大学 ， 云南昆明 650201 摘 要 将双价抗虫基因 ， 即修饰的苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因 (Cry1Ac) 和修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck) 导入甘蔗优良品种 ROC22 ， 获得潮霉素抗性转化植株 95 株 ， 35 株能检测到外源抗虫基因 ， 获得的 13 株 RT-PCR 双基因均呈阳性的甘蔗植株 ， 斑点杂交检测有 4 株呈阳性 。 结果表明 ： 外源抗虫基因已导入甘蔗基因组中 。 关键词 甘蔗 ； 根癌农杆菌介导法 ； Cry1Ac ； sck ； 遗传转化 中图分类号 S688 文献标识码 A Genetic Transformation of Cry1Ac and sck Gene into Sugarcane WU Zhuandi 1 , WU Caiwen 1 * , ZHEN Qianchun 2 , SU Huosheng 1 LIU Xinlong 1 , YAO Li 1 , ZHANG Min 1 , LIU Jiayong 1 1 Sugarcane Research Institute, Yunnan Academy of Agricultural Sciences / Yunnan Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement, Kuaiyuan, Yunnan 661699, China 2 Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan 650201, China Abstract In the paper sugarcane, th