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万古毒素键合硅胶整体柱的制备及其在毛细管电色谱中的应用 董晓莉，董靖欧俊杰，微技术固定相和流动相消耗量，，易于和质谱联用等成为分离科学研究中的热点和趋势。在手性拆分上的应用也越来越广泛，例如微柱液相（CLC）[40, 148-150]、毛细管电泳（CE）[151-156]和毛细管电色谱（CEC）[48, 90, 157-164]；其中CEC在手性分离上的应用尤为突出。CEC 既具有电泳的高效性，亦具有高效液相色谱的高选择性，很多在液相色谱中应用的手性固定相，都已通过电色谱柱应用于电色谱中。 CEC的心脏，而原位制备的毛细管整体柱（monolithic column）是CEC中的热点研究课题。这种色谱柱制备方法简单，由于使用的聚合方法中的功能单体多样化，因此该类柱种类丰富多彩，可根据需求不同制备出满足条件的整体柱。此外，毛细管整体柱还可以避免制作塞子的麻烦，并克服塞子易产生气泡的不足。目前已有手性毛细管整体柱用于分离的报道[50, 66, 165]。作为一类重要的整体柱类型，硅胶整体柱在继承了硅胶械强度好，柱效高，寿命长，表面积大和易于化学修饰等优点的同时，还由于具有独立可控的通孔和中孔结构而克服了填充柱柱压过大的不足，泛的应用。目前，应用在硅胶整体柱上的手性固定相包括蛋白类[30, 107, 108, 166]，环糊精类[111]，离子交换型[114]，配体交换型[49, 50]和纤维素类[110, 167]。 大环抗生素Armstrong等[32]首次其发展极为迅速, 高效液相色谱(HPLC)、薄层色谱( TLC)、毛细管电泳(CE)、毛细管电泳－质谱(CE-MS)和毛细管电色谱(CEC)分离机理的研究也逐步深入[168, 169]。近年来它们也成为CEC分离中具有良好应用前景的手性选择试剂[97, 170-174]这些物质具有多个能够形成氢键的具有疏水基团又具有亲水基团易溶于缓冲溶液微溶于有机溶剂CSP提供了方便。此外它们在CEC 缓冲溶液中具有足够的稳定性。其中万古霉素是抗生素中手性选择能力最强的抗生素之一[97, 172-174]。Kornysova等人将键合万古霉素的聚丙烯酰胺整体柱用于CEC手性药物分离[137, 175]只有四种药物能被拆分。而目前还没见到过采用万古霉素键合的硅胶整体柱用于CEC分离的报道。 硅胶整体柱因此我们认为采用硅胶整体柱作为万古霉素CSP的载体进一步提高其手性选择性及柱床稳定性。 在本章工作中，将万古霉素化学键合到整体柱表面 2 材料与实验 2.1实验部分 2.1.1药品与试剂 试剂： 正硅酸甲酯（TMOS）购自武汉大学化工厂（武汉）。聚乙二醇（PEG, Mn=10,000）购自Aldrich 公司（Milwaukee, WI, USA）。3－缩水甘油氧丙基三甲氧基硅烷购自Sigma-Aldrich（Gillingham，Dorset，英国）；尿素购自华美生物工程公司；万古霉素购于新昌制药厂。甲醇及乙腈为色谱纯；磷酸氢二钠(分析纯，上海新华化工厂)磷酸二氢钠(分析纯，沈阳试剂三厂)甲醇(分析纯)乙腈(色谱纯)其它所用样品均为分析纯。所有实验用水由Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA)超纯水净化装置制备。安息香（benzoin），吲哒帕胺（indapamide）， 托格尔碱（Tr?ger’s base）吡喹酮（praziquantel），阿普洛尔（alprenolol）,阿替洛尔（atenolol），美托洛尔（metoprolol），特布他林（terbutaline），吲哚洛尔（pindolol），普萘洛尔（propranolol），华法令（warfarin）和酮基布洛芬（ketoprofen）购自Sigma公司（St. Louis, MO, 美国）；联苯类化合物DDB和DDBA由刘月启博士提供；四氢巴马亭（tetrahydropalmatine），雷诺嗪（ranolazine），羟嗪（hydroxyzine）由中国生物样品检定所提供。设备： Waters 510液相色谱泵(Waters公司USA)用于冲洗毛细管柱。恒温水浴锅（龙口市科学仪器公司，中国）用于加热毛细管。气相色谱仪(依利特公司，大连)用于加热毛细管。显微镜 XSP-16A用于观察毛细管柱。 流动相为磷酸盐缓冲溶液-乙腈。所有溶液均用超纯水配制，用0.45 μm滤膜过滤。 ?μm I.D.×375?μm O.D.熔融石英毛细管，购于河北永年光导纤维厂。 2.1.2 毛细管内壁的预处理 首先用0.1 mol/L NaOH溶液冲洗石英毛细管30 min，用去离子水冲洗10 min；接着用0.1 mol/L HCl溶液冲洗毛细管2 h，再用去离子水冲至流出液为中性；最后用甲醇冲洗10 min，并用