脂肪甘油三酯脂酶载体构建.PDFVIP

第8卷 第11期 Vol.8 No.11 2015 年 6 月 June 2015 脂肪甘油三酯脂酶载体构建 李松涛，栗晓霞，吕 琳，李 颖，孙长颢* （哈尔滨医科大学公共卫生学院，哈尔滨 150080） 摘要：目的：研究旨在构建脂肪甘油三酯脂酶（adipose triglyceride lipase，ATGL）基因的表达载体。方法： 调取 C57BL/6 小鼠 ATGL 基因的 cDNA 文库，并使用高保真 Taq 酶克隆出含有相应酶切位点的 ATGL 编码区 全序列，并通过基因测序验证序列准确性。得到的目的基因片段利用 T4 链接酶接入 pBluescriptⅡ质粒中，并 再一次通过基因测序确定重组质粒连接的准确性。建好的质粒继而转染 HEK293 细胞，检测细胞中 ATGL 的 mRNA 和蛋白水平。结果：PCR 产物双酶切和基因测序确定连接正确，细胞中 ATGL 的 mRNA 和蛋白表达量 显著增高。结论：成功构建了 C57BL/6 小鼠 ATGL 基因的表达载体，建好的载体可用于 ATGL 基因功能的后 续研究。 关键词：预防医学与卫生学其他学科；脂肪甘油三酯脂酶；C57BL/6 小鼠；载体构建 中图分类号：R-331 文献标识码：A 文章编号：1674-2850(2015)11-1204-05 Construction of adipose triglyceride lipase expression vector LI Songtao, LI Xiaoxia, LÜ Lin, LI Ying, SUN Changhao (Public Health College, Harbin Medical University, Harbin 150080, China) Abstract: Objecive: To construct the expression vector of adipose triglyceride lipase (ATGL). Methods: we retrieved the cDNA library of the ATGL gene of C57BL/6 mice and cloned the coding region containing the corresponding restriction sites of the whole sequence of ATGL by using high-fidelity Taq enzyme, and then verified the accuracy of the sequence by gene sequencing. we connected the target gene and pBluescriptⅡplasmid through T4 ligase, determined by gene sequencing accuracy to make sure that the sequence was correct and then transfected the HEK293 cell with recombinant plasmid and detected the express level of ATGL mRNA and protein. Results: The PCR products of enzyme digestion and gene sequence are coincided with expectation. ATGL mRNA and protein expression in the cells are significantly increased. Conclusion: The results show that the ATGL recombinant expression vector is constructed successfully, which can be used to study the following function of ATGL gene. Key words: other subjects of preventive medicine and hygienic; adipose triglyceride lipase; C57BL/6 mice; construction of expressing vector 0 引言 ATGL 长度为 610 kb，含有 9 个内含子，mRNA 为 1 480 bp，蛋白 55 u. 该酶于 2004 年被发现，现有 研究显示它是一