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植物生殖工程 第一节 植物生殖工程的概念与概况 一、植物生殖工程的概念与研究范围 植物生殖工程(plant reproduction engineering或plant reproductive ceIl engineering)是通过控制和利用植物有性生殖过程而改良植物的应用技术领域，主要指在离体条件下以生殖细胞和原生质体为对象所进行的遗传操作。它是当前生殖生物学研究的一个热点。植物生殖工程是建立在植物生殖生物学和实验生殖生物学的基础上的，三者之间相互联系、相互促进。杨弘远和周嫦(1989)认为，植物生殖生物学是以认识植物生殖过程的自然规律为基础的研究学科，植物生殖工程是进行改良植物的应用技术领域，而实验生殖生物学则是把二者联结起来的桥梁。 植物生殖工程包括整个有性生殖过程的控制和利用，比受精工程(fertilization engineering)的范围更广，改造植物遗传性的能动性更强。植物生殖工程操作的对象是生殖的器官、细胞，与体细胞工程比较具有独特的优点。①有性生殖是大多数植物的自然生殖过程，是无性生殖或无融合生殖过程所不能取代的。这种顺乎自然的繁衍后代的生殖过程是一种阻力较少的途径。②生殖过程中提供了许多基因操作的机会，如花粉管是引导雄配子完成受精作用的运载工具，具有作为外源基因载体的功能。③植物生殖系统中拥有许多天然的单倍体细胞，可以直接制备单倍体原生质体。在雄性生殖系统中包括小孢子四分体、小孢子、花粉粒、花粉管、生殖细胞、精子。在雌性生殖系统中包括有大孢子、胚囊、卵细胞及其他胚囊成员细胞。这些细胞都是单倍体。精细胞为天然原生质体，卵器细胞、中央细胞在一定阶段存在半原生质体状态。操作这种天然的原生质体比酶法分离原生质体更具优点。④生殖系统中丰富多样的细胞类型可用于不同研究途径。⑤单倍性的生殖细胞经过减数分裂发生了各种形式的遗传重组，具有极大的遗传变异性，因此通过生殖工程操作可以直接获得各种类型的新个体(杨弘远、周嫦，1989；胡适宜，1986；Bajaj，1983)。 植物生殖工程包括二大生殖系统：雄性生殖系统和雌性生殖系统；两种操作方式：活体操作(in vivo manipulation)和离体操作(in vitro manipulation)；三个研究水平：即器官、细胞和原生质体水平。器官操作包括花药培养、子房培养和胚珠培养、胚和胚乳培养、试管受精等。细胞操作主要是指花粉和胚囊的分离和培养；原生质体操作是指由四分体或胚囊细胞分离而获得原生质体并进行培养；受精工程即离体的精卵细胞的融合和培养。 二、植物生殖工程研究简介 1.离体器官操作 (1)试管授粉 试管授粉或试管受精是指为了克服交配的不亲和性，离体培养子房或胚珠而在试管中完成受精过程。这种技术已较广泛地应用于克服远缘杂交或自交不亲和性。 (2)子房和胚珠培养 它包括受精或未受精子房和胚珠培养。受精子房和胚珠培养的目的也是在于克服杂交或自交胚的败育，详见第六章。未受精子房和胚珠培养既是诱导卵器细胞形成单倍体植株进行单倍体育种的途径，又是研究人工诱导无融合生殖和实验生殖生物学的好方法，下一节中将予以详细介绍。 (3)胚和胚乳培养 胚培养是克服远缘杂交困难经常采用的方法(见第七章)。胚乳是极核受精的产物，一般多为3n。因此进行胚乳培养的目的之一，在于培养三倍体植株以获得无籽的瓜果，如无籽西瓜、无籽柑桔和无籽枇杷等。 (4)花药培养 离体培养花药是大量获得单倍体进行单倍体育种和遗传学研究的重要技术，也是研究雄核发育(androgensis)等生殖生物学问题的良好方法。 (5)再生雄蕊和花粉的研究 离体再生雄蕊和花粉对于研究整个雄性系统的发育和调控具有十分重要的意义。该项研究首先由陆文梁(1988)在风信子上获得成功。 2.离体细胞的操作 (1)大孢子母细胞、大抱子和胚囊的分离 大孢子母细胞、大孢子和胚囊被子房壁、珠被、珠心组织所包裹，长期以来不能直接研究和利用。自从70年代前苏联学者用酶法分离烟草、列当活胚囊以后，周嫦和杨弘远(1982、1984)，胡适宜等(1985)改进技术方法，采用酶解、振荡分离纯化技术或压片技术获得固定的或生活的大孢子母细胞、大孢子和胚囊。在烟草、泡桐、芝麻、颠茄、金鱼草等植物中获得成功，为直接研究这些细胞和进行遗传操作奠定了基础。 (2)花粉培养 花粉培养是吸收花药培养的经验，直接培养游离花粉。花粉培养的优点是：①可以直接观察研究培养条件下花粉细胞的发育、脱分化与再分化过程。②体细胞组织来源的愈伤组织或胚状体形成的植株及混倍体的频率均可大幅度降低。③可以减少体细胞对花粉细胞发育的竞争和抑制作用，提高花粉诱导频率和成苗率。因此花粉培养代表着单倍体育种的发展趋势。花粉培养已在烟草、油菜、水稻等作