DNA分子标记技术在水产动物重要经济性状基因筛选中的应用-海洋科学.doc

动物重要经济性状相关分子标记筛选及应用的研究进展 倪静1，2 尤锋1 张培军1 徐永立1 （中国科学院海洋研究所 青岛 266071） （ 中国科学院研究生院 北京 100039） 每一个生物个体，有许多进化上非常重要的性状，如身体大小、生长速度、抗病能力等，称为数量性状。数量性状与生产性能的经济价值相联系，因而一直是动物育种学家关注和倾心研究的热点。数量性状的研究通常是借助各种遗传标记，运用统计学方法，将影响数量性状的多个基因剖开，使其定位于特定的染色体上，最终分析出其DNA序列。在此基础上，还可进一步利用标记与数量性状位点（quantitative trait locus, QTL）间的连锁关系对数量性状进行遗传操作。 DNA分子标记技术是根据基因组DNA 存在丰富的多态性而发展起来的可直接反映生物个体在DNA水平上的差异的一类新型的遗传标记技术。它是继形态学标记、细胞学标记、生化标记之后最为可靠的遗传标记技术，并取得了快速的发展。DNA分子标记主要包括：线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)、限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP)、随机扩增多态性DNA (Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)、扩增片段长度多态性(Amplifted Fragment Length Polymorphism，AFLP)、单链构象多态性（Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP）、微卫星 (Microsatellite DNA),又称简单序列重复(Simple Sequence Repeat，SSR)、单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymerphism，SNP)、表达序列标签(Expressed Sequence Tags，ESTs)等标记技术。DNA分子标记技术为动物遗传学的研究开辟了道路。目前，它已被广泛地应用在动物基因定位、品种鉴定、资源评价、物种亲缘关系和系统演化分析、遗传育种等许多方面。其中，在遗传育种这个领域，利用分子标记技术可以进行种质资源中重要经济性状基因的分子作图与标记，在育种中可以不受环境条件的干涉与影响，做到准确地对育种目标进行选择可以大大缩短育种周期，提高育种效率。因此，利用DNA分子标记技术，开展动物重要经济性状(包括与生长、发育、生殖、抗病、抗寒、抗逆、性别控制等有关的数量性状和质量性状)的分子标记的研究，寻找与重要经济性状相关的分子标记，构建遗传连锁图谱，对这些重要功能基因进行克隆和结构与功能分析，建立分子标记辅助育种技术，选育出高产的优良品种，这已经是未来养殖业发展的趋势。到目前为止，这些分子标记技术在畜牧类动物中进行了非常广泛的应用，但在水产动物本文将介绍利用目前应用比较广泛的几种DNA分子标记技术RFLP、SSCP、 AFLP 、微卫星和SNP在动物重要经济性状基因分子标记方面的研究进展，旨在为遗传育种研究工作提供一些有价值的参考资料。RFLP是指用限制性内切酶消化不同个体的DNA后产生的酶切片段在长度和数量上的差异，其多态性是因为在DNA某个区域发生缺失、插入、点突变而引起酶切座位的丢失或获得，它是出现较早的第一代分子标记技术。尽管相比较其他技术，RFLP的多态检出率比较低，相对比较耗时，但是可靠性高，重复性好而且对实验设备的要求较低，可以在一般实验室操作，因而该种方法一问世就得到了广泛的应用。在牛中，用PCR-RFLP分析技术，等（2007）以中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛为研究对象，以TLR4为乳房炎抗性的候选基因，分别采用SSCP和RFLP-AluI方法来检测TLR4基因的多态性。结合测序发现：在intronl的第4525bp处的A→G 的突变，和exon3的第1397bp处的T→C 突变TLR4基因T4CRBR1片段的AA基因型为乳房炎抗性基因型（P0.05）A等位基因为乳房炎抗性的有利基因。张争锋等（2007）以131头纯种南阳牛为研究材料，利用PCR-RFLP对二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因的第6内含子和第7内含子的多态性及其与生长发育的相关性进行了分析。结果：南阳牛在该位点分别检测到两种等位基因AB和NM，内含子6的AA基因型的6月龄的体高比杂合型高38％，两岁体重高39％，6月龄到两岁的胸围分别高38％、34％、37％、43％6月龄到两岁的体斜长分别高38％、36％、38％、31％。内含子7对l8月龄和两岁的坐骨端宽有极显著的影响(P.01)；对两岁的胸围有显著的影响(P0.05)。在猪中，PCR-RFLP方法Li等 (2003) 以长白×蓝塘猪资源群Ｆ