高速逆流色谱技术及应用.ppt

高速逆流色谱技术及应用 —无耗材制备色谱技术 　　　　　　 杨琪 　　　　　　　　　上海同田生物技术股份有限公司;主要内容;逆流色谱发展史;;混合区：在靠近离心轴心大约有四分之一的区域，两相的激烈混合 静置区：两相溶剂分成两层，重相在外部，轻相在内部;K ＝ Cs/Cm ;HSCCC的工作流程;HSCCC系统组成;主要内容;;HPCCC chromatograms of crude Houpu. Conditions: column volume:18ml Solvent system: hexane-ethyl acetate- Methanol -water (1:0.4:1:0.4) Stationary phase: lower aqueous phase Mobile phase: organic upper phase Rotational speed: 1800rpm Flow rate: 2.5ml/min Detection wavelength: 254nm Temperature: 30 ℃ Sample volumes: 0.05ml ;高效液-液分配色谱技术 萃取级数每秒17次 制备量大 前处理简单 无吸附损失 重现性好 低成本 多样性的操作条件 ;高速逆流色谱法原理;高速逆流色谱技术的应用领域; ;;蛇床子中香豆素的HSCCC分离;白花前胡甲素;长春碱提取物的HSCCC分离;紫薯花青素的HSCCC分离; 与HPLC比较,其优点是溶剂酸度选择范围大,长时间适用低pH值的溶液对分离效果没有很大影响，且无仪器损耗。;B1;溶剂体系：石油醚-丙酮-水（3:3:2,v/v）样品：250mg 环孢菌素粗品检测条件：ELSD;溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5％氨水 (3:7:5:6,V/V） 检测器：ELSD；进样量：300mg ;实例1 利用HSCCC分离标准蛋白质混合物;溶剂体系：PEG1000-磷酸二氢钾-水＝15-17-68(%,w/w)样品：1mg 细胞色素C、8mg 肌红蛋白、20mg溶菌酶;主要内容; 实例1 藤黄酸异构体的分离; 实例2 (±)-2-phenylpropionid acid 分离;HSCCC应用-分步洗脱　;HSCCC应用-分离模式切换　;HSCCC应用-进样后平衡　;