2徐瑩20生物工艺学－第2章菌种选育.pptVIP

第二章 菌种选育; 本章学时分配：8学时 本章授课内容： 第一节 菌种来源 微生物优良生产菌种的特征 第二节 菌种选育 自然突变选育 诱变选育 微生物细胞水平基因重组育种 重组DNA技术——分子育种 第三节 衰退、复壮和菌种保藏 ;;;一、工业生产常用的微生物;;;2、酵母菌（yeast）;;;3、霉菌（mould）;;;;;;4、放线菌（actinomycetes）; 5、担子菌（basidiomycetes） 6、藻类（algae）;;;三、 自然界工业菌种分离的原则;自然界菌种分离和筛选的主要步骤 采样 增殖培养 纯种分离 筛选 ; 典型的微生物采样和筛选方法 ;;（一）采样 ;;;①气候、水分等环境特点 采样地点 采土的深度：一般离表层5～15cm 土壤的植被情况：如豆科植物下的土，根瘤菌较多；果树下的土，酵母菌较多。 采土的最适季节。一般应避免雨季采土，而以秋季采土比较理想。 土壤的酸碱度。 细菌和放线菌在中性或偏碱性土壤中较多； 酵母菌和霉菌，一般在偏酸性的土壤、普通植物花朵、瓜果种子及腐植物等上面较多。;;;;（二）目的微生物增殖;①随机： 不能提供任何有助于筛选产生菌的信 息，只能通过随机的办法;;Date;定向培养的方法： 1）控制一定的养分，需根据微生物的不同种类选用相应的富集培养基； 唯一碳源：如要分离水解酶产生菌，可在富集培养基中以相应底物为唯一碳源 淀粉琼脂培养基通常用于丝状真菌的增殖，配方为（%）：可溶性淀粉4，酵母浸膏0.5，琼脂2，pH6.5～7.0。 如要分离耐高渗酵母菌：首先要到含糖分高的花蜜、糖质中去取样。富集培养基为5%～6%的麦芽汁，30%～40%葡萄糖，pH3～4，在20～25℃温度下进行培养。 ; 2）抑制不需要的菌类； 土壤中分离芽孢杆菌时，将土样加热到80℃或在50%乙醇溶液中浸泡1h； 筛选霉菌时，加入四环素等抗生素抑制细菌， 分离放线菌时，加入加青霉素（抑制G+菌）、链霉素（抑制G- 菌）各30～50U/ml，以及丙酸钠10μg/ml（抑制霉菌类）抑制霉菌和细菌 ; 3）控制培养条件。从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择。 如温度、pH、光照、氧气、营养等。 当样品中的细胞数较少时(如水)，???常采用膜过滤法。 如细菌、放线菌的生长繁殖一般要求偏碱（7.0～7.5），霉菌和酵母菌要求偏酸（4.5～6）。 分离放线菌时，可将样品液在40℃恒温预处理20min。 ;;;;不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征 （形状、颜色等），是微生物分类、鉴定的重要依据。;同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落 ;有些微小生物必须用液体培养基分离纯培养，如原生动物、藻类。 ;显微分离法直接分离单细胞或单个个体培养获得纯培养;;2. 控制培养条件，提高筛选工作效率 1）? 控制营养成分 在一般情况下，按照各大类微生物常用的培养基进行分离。 细菌——蛋白胨牛肉膏琼脂培养基 放线菌——淀粉琼脂培养基 酵母、霉菌——麦芽汁或米曲汁培养基。 特殊： 分离分解纤维素的微生物，纤维素做为唯一碳源。 淀粉做为唯一碳源，具有淀粉酶类的微生物就能很好生长。 针对产生诱导酶类的微生物，必须要有某种分解底物存在。;举例： 使用固体培养基分离某些酶产生菌，其选择培养基中常含有该酶的作用底物。;;;;;;;（四）筛选及发酵性能测定 1.初筛：根据某种微生物自身的特性(如:生长繁殖特征、代谢产物的特性等)，采取特定的定性或定量分析的分离方法。 菌株多，工作量大 ;;;;;;第二节 菌种选育;;;;育种方法;一、自然选育;;;;;1)从生产中选育 例如，从污染噬菌体的发酵液中有可能分离到抗噬菌体的自发突变株； 2)定向培育优良品种 ;;;;异烟肼是一种抗代谢药物，能阻止敏感菌的生长； 吡哆醇是异烟肼的结构类似物，不能阻止敏感菌的生长。 当敏感菌能在含异烟肼的培养基上生长时，可能是产生了能 分解异烟肼的酶类的突变株或者是能合成更高浓度的吡哆醇， 克服了异烟肼的竞争性抑制。;;回复突变：高产菌株在传代的过程中，由于自然突变导致高产性状的丢失，生产性能下降，这种情况称为回复突变。;二 诱变育种 诱变育种：使用诱变剂对微生物进行人工诱变，使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 优点：速度快、方法简便等。 当前菌种选育的一种主要方法，使用普遍。;Date;1、诱变育种的基本环节;2、诱变育种的基本过程：;;;（一）诱发突变 （1）选择好出发菌株 出发菌株