mRNA差显法和SSH法的比较及其在水生动物基因研究中应用(精选).docxVIP

mRNA 差显法和SSH法的比较及其在水生动物基因研究中应用 孙伟男1 张 玉1 （1内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特 010018） 摘要： mRNA差异显示技术是一种快速有效的克隆差异表达基因的方法。基本原理，就是将基因背景相同的2个或几个细胞系或组织mRNA逆转录成cDNA，用不同引物对，进行PCR扩增，扩增时加人同位素标记的核苷酸。用测序胶电泳分离PCR产物，经放射自显影即可找到被扩增的差异表达的基因。SSH法（抑制性消减杂交技术），该技术是Diatchenko 等1996年在抑制性PCR的基础上建立起来的cDNA消减杂交方法，它克服了DD法的假阳性较高和RDA法消减杂交轮次较多的缺点，十分适用于克隆分析造成某种特殊表型的目的基因及其功能。 关链词：mRNA 差显法；SSH；抑制性消减杂交技术；PCR Abstract mRNA differential display technique is a fast and efficient cloning of differentially expressed genes. Basic principle is the same as the genetic background of two or more cell lines or tissue mRNA reverse transcribed into cDNA, using different primer pairs for PCR amplification, amplification of isotope-labeled nucleotides added. Separated by sequencing gel electrophoresis of PCR products, can be found by autoradiography to be amplified differentially expressed genes. SSH method (Suppression subtractive hybridization), so the technology is Diatchenko inhibitory in 1996 built on the basis of PCR of cDNA subtractive hybridization method, which overcomes the high false-positive DD Act and the RDA subtractive hybridization method compared with round many shortcomings, is very suitable for cloning analysis of the phenotype caused by a particular gene and its function. Key words RNA differential display method; SSH; suppression subtractive hybridization; PCR mRNA差异显示技术是一种快速有效的克隆差异表达基因的方法。抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术。这两种方法都是与基因克隆有关的技术，分别建立于1992年Liang P、Pardee和1996年Diatchenko，两种方法各有优缺点。 mRNA差异显示技术要求的poly（A）＋RNA样品的用量较少，灵敏度较高。但是操作步骤多，外源DNA污染严重而导致假阳性率高，即差异片断用Northern杂交时无阳性信号，重复稳定性较差。 SSH法使用四碱基识别酶酶切，可防止cDNA片段形成复杂结构而影响杂交，同时使同一基因家族来源的片段不易交互杂交，大大提高了片段的代表性，提高了基因克隆的效率，提高了信息量，在一次SSH实验中可同时分离出上百个差别表达的基因。但SSH对起始材料相对要求较多（需数微克），使其不适于来源困难的样品。 1 mRNA差异显示技术 mRNA差异显示技术（mRNA differential display）是一种快速有效的克隆差异性表达基因的方法。方法建立：1992年Liang P和Pardee首次应用DD技术对比人类乳腺癌细胞与正常细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所特有的基因。 mRNA差异显示技术是将mRNA逆转录技术和PCR技术相结合的一种RNA指纹图谱技术。差异基因表达是细胞分化的基础。正是这些基因在细胞中的特异表达与否，决定了生命历程中细胞的发育和