栽培甘薯的基因组中包含土壤杆菌属T-DNA表达基因试题.docx

栽培甘薯的基因组中包含土壤杆菌属T-DNA表达基因 —自然转基因粮食作物的一个例子 摘要：发根农杆菌和根癌土壤杆菌是植物病原菌,具有承载功能基因转移DNA片段(转移DNA(本文)]进入宿主植物基因组的能力。这种自然发生的机制已经应用于开发转基因作物,种植在超过世界10%的耕地上,尽管它们的使用可能会导致相当大的争议。当组装甘薯的小干扰RNA,或siRNAs用来作宏基因组分析时,从脓杆菌中发现了T-DNA同源序列。简单定量PCR,southern杂交,基因组步行,细菌人工染色体库筛选和测序，明确表明, 在栽培甘薯(番薯甘薯(Ipomoea batatas [L.] Lam.)基因组中发现了两个不同T-DNA区域(IbT-DNA1和IbT-DNA2)，这些外源基因在甘薯植物的不同组织中表达。IbT-DNA1被发现含有四个与iaaM,iaaH,c蛋白(C-prot)和 (Acs)基因同源的土壤杆菌(orf)【开放读码框架】。IbT-DNA1存在于所有被检测的291种生物中，但在野生近缘中不存在。IbT-DNA2包含至少5个ORFs??与土壤杆菌的 ORF14,ORF17n,根轨迹(Rol)B / RolC, ORF13 和ORF18 / ORF17n基因具有显著的同源性。IbT-DNA2在217个基因型中的45个基因型中被发现,包括栽培和野生种。我们发现,甘薯是自然转基因而形成的一种广泛和传统消费的粮食作物,可能对当前消费者对转基因粮食作物的安全性认识产生影响。 关键词：水平基因转移|农杆菌属|食品安全甘薯|转基因作物 水平基因转移(HGT)长期以来一直被认为是一种自然现象,尤其是在细菌之间,但在真核生物的基因组中也不断的被发现(1)。许多水平基因转移的实例包括基因从各种蛭形轮虫中的捐赠者中转移，(2)或者从细菌细胞内的沃尔巴克氏体转移到各种昆虫和线虫的基因中(3,4)。有些转移的基因在受体中不是功能性的，而其他的被转录，形成获取新基因的运行机制。一些水平转移基因经被认为与特定表型的发生有关。例子包括类胡萝卜素生物合成基因从真菌转移到蚜虫中,导致蚜虫的颜色呈红色或绿色 (5),或基因从角苔类植物转移到蕨类植物中, 导致形成更有效的感光体蕨类。HGT从微生物到植物的转移有广泛的记录。也许最熟悉的例子是T-DNA从农杆菌中的转移。这个水平转移基因经常导致冠缨的发生，他的转移机制被广泛研究并被普遍的理解(7、8)。 冠瘿病是果园和葡萄园影响尤为严重的一种疾病。长久以来,它被认为是细菌引起的(9)。19世纪70年代,发现了冠缨病是由于一部分Ti质粒【肿瘤诱导质粒】的转移产生的，T-DNA从根癌土壤杆菌进入到寄主植物。T-DNA的从相关细菌即发根农杆菌的Ri【毛根诱导质粒】质粒转移，在侵染位点诱导产生丰富的增殖根。一旦集成，T-DNA基因就会被表达出来，诱导产生瘤或毛状根，还在被侵染的植物组织中产生冠缨碱。冠缨碱的合成类型被用来区分Ti和Ri质粒属于章鱼碱、胭脂氨酸还是脓杆碱质粒。 发根脓杆菌的农杆碱菌株在他们的Ri质粒中包含两个物理性的T-DNA区（TR-DNA和TL-DNA）。他们都独立地整合到宿主基因。TR-DNA通常编码冠瘿碱合成所需要的蛋白质，还有生长素生物合成基因（iaaM）【色氨酸过氧化酶】，（iaaH）【吲哚乙酰胺水解酶】和研究较少的编码C蛋白的（ORF）。TL-DNA包含ORFs，编码根轨迹（ROL）基因的RolA（ORF10），ROLB（ORF11），RolC（ORF12）和RolD(ORF15）等，参与生长素/细胞分裂素的平衡。另外还有其他功能还不太清楚的基因如ORF8，ORF13，ORF14，ORF18（18，19）等。ROLB，RolC，ORF8的5，IAAM 的5，还有其它高度分化的T-DNA基因，他们的DNA相似性还未检测，但在白质水平有显著的相似性（20）。 意义 测试的291种种植红薯,都包含一个或多个转移DNA序列(T-DNA)。这些序列,在栽培甘薯克隆(“Huachano”)中被表达，通过详细分析，认为土壤农杆菌属侵染发生在进化时期。T-DNA的某一种显然存在于所有的栽培甘薯克隆中，但是在与野生亲缘关系密切的作物中却不存在。认为T-DNA在进化过程中提供了一个特性或者被选择的特性。这个发现把研究的重点集中到了植物与微生物的互作作用，得出了这种吃了几千年的作物也是转基因植物的结论，也许能够改变人们对转基因作物“非自然”状态的看法。 农杆菌介导基因转移被发现后不久，就有报道说烟草基因中存在发根农杆菌T-DNA。这些来源于不同发根农杆菌菌株的T-DNA序列表现在烟草属植物中，并传递给下一代，但他们表达水平较低，而且与土壤杆菌侵染而引发的发根和根瘤没有什么联系。蓝粉烟草中的Rol基因在烟草的不同发育过程和形态特征