2 基因功能研究2---转基因.pdfVIP

第二节 转基因 ?基因功能获得策略 ?本质是将目的基因直接导入某一细胞或个 体中，使其获得新的或更高水平的表达， 然后通过细胞或个体生物性状的变化来研 究基因功能。 第二节 转基因 主要方法： 一、 脯乳动物细胞的基因转染 二、 转基因动物 三、 基因敲入 一、哺乳动物细胞的基因转染 (gene transfection) 必要条件： 目的基因 (purpose gene) 真核表达载体 (expression vector) 宿主细胞 (host cells) 一、哺乳动物细胞的基因转染 真核转染载体的必备元件： ? 必要的顺式作用元件，如：真核启动子，polyA signal ? 真核筛选标记基因 ?目的基因序列：起始密码和终止密码 ? Kozak 序列：是真核 Coding sequence 核糖体高效率起始翻译 -6-5-4-3-2-1+1+2+3+4 所必需的序列。+4G 和- (gcc)gccRccATGG----TAA 3A 对于核糖体识别AUG 一般是嘌呤(A 或G) 有显著的促进作用，是 Kozak sequence 翻译起始所必需的 二、转基因动物 主要内容： （ 一） 概念 （二） 制做步骤 （三） 应用 （四）存在问题 （ 一） 概念 * 转基因技术（transgenic technology）是指将外源 基因导入受精卵或胚胎干细胞（embryonic stem cell，即ES 细胞），通过随机重组使外源基因插入细胞染色体DNA。 随后将受精卵或ES细胞植入假孕受体动物的子宫，使 得转基因细胞发育成携带外源基因，并能稳定遗传的动物。 * 转基因动物（transgenic animal） 指将外源基因导入胚胎干细胞或受精卵细胞中， 外源基 因随机插入到受体细胞的染色体DNA中，从而获得携带外源 基因，并能稳定遗传的动物。转基因小鼠最为常见。 （二） Transgenic animal 的制备步骤 * 基本流程*： (1) 转基因表达载体的构建 Enhancer target gene NeoR P (2) 将外源基因导入受精卵（或ES cell）细胞核内 两种方法： 前核法 胚胎干细胞法 pronuclei Fertilized egg ES cells (3) 上述转基因细胞移植入假孕小鼠的子宫腔中； ?转基因是随机整合到染色体上。 ?一般情况下，转基因杂合子的几 率在 以下 Psuedopregnant 10-20% mouse (5) (4) 检测子代是否是 通过杂合子后代 转基因杂合子 交配，获得纯合 子转基因动物 （三）转基因动物的应用 (1) 基因功能的研究 1982年美国哈佛大学的一个科学家小组，将大鼠 的生长激素（rGH）基因与小鼠的金属硫蛋白基因 的启动子顺序连接，再引入质粒中。科学家把这种 重组的质粒直接注射入小鼠受精卵中，经过充分发 育后终于分娩出了21小鼠，其中有七只带有融合基 因，六只生长迅速，每只体重平均可达44g，超过同 窝无融合基因小鼠（平