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基因功能的鉴定技术 Strategies for analyzing gene function 教师：王华 单位：吉 林 大 学 基础医学院 分子生物学教研室 电话(L) Next will be more stories 基因功能的鉴定技术 第三节 RNA干涉 在基因水平上 在mRNA水平上 基 转 反义RNA RNA干涉 因 基 敲 因 除 技 技 术 术 一、反义RNA（anti-sense RNA） 定义：与mRNA互补的RNA链，称作反义 RNA。 用途：封闭特定mRNA的翻译，从而使基因失活。 实例： BCL-2 癌基因的anti- sense oligonucleotide， 通过与细胞内mRNA互 补，封闭该基因的表达， 从而治疗 B 淋巴瘤 和 白血病。 BCL-2癌基因 二、 RNA干涉（ RNA interference, RNAi） 2006年 Andrew Z. Fire Craig C. Mello Stanford University School University of Massachusetts of Medicine Medical School 美国科学家安德鲁·法尔(左)和克雷格·梅洛(右)： 发现了ＲＮＡ干扰机制。 二、 RNA干涉（ RNA interference, RNAi） 提要 （一） 历史 （二） 机理* （三） RNAi 技术的两种常用策略* （四） RNAi 技术的用途 （五） RNAi 技术存在的问题 （一）RNAi 的历史 问: ?你知道最早发现RNAi现象是在什么情况下吗？ 1995年，康奈尔大学Su Gou 博士的实验： ?用反义RNA (anti-sense RNA)转染线虫可以阻断par-1基因的表达； ?惊讶地发现：在正义RNA (sense RNA) 的对照组中没出现预期的增 强基因表达的现象，却出现了基因表达受抑现象。 Why ？ 这与传统上对反义RNA技术的解释正好相反，他们一 直没能给这个意想不到的结果作出合理解释。 提示: ?一些实验现象可能是当时知识背景下所不能认识的， 但客观地呈现这些实验现象是非常重要的。 1998年: ? Fire和Mello的实验揭开这个悬疑之谜： （1）用纯化后的单链RNA注射线虫，基因抑制现象是非常微弱的！ （2）将双链RNA给线虫注射，出现了高效、特异性的基因抑制效应。 （3）Su Guo博士在转染正义 RNA时污染了微量反义RNA，“十分错误” 地将双链RNA (dsRNA) 导入了细胞。 他们将这种由双链RNA（ds-RNA） 引起的特异性基因抑制现象，称作 RNA干涉（RNAi）。 Fire, A. et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Andrew Z. Fire Craig C. Mello Stanford University University of School of Medicine Massachusetts Medical Nature 391, 806-811. (1998) School （二） RNA 干涉（RNAi）的机理 想想： ? 由于antisense-RNA的原因, 在细胞内出现dsRNA正常吗？ ? 细胞内是否存在特异性降解