微生物发酵重点能量版微生发酵重点能量版.doc

绪论 1、发酵：发酵是指利用微生物进行生长和代谢活动，并通过现代化工技术，进行微生物代谢活动形成各种有用产品的过程，包括有氧和无氧呼吸的发酵。 2、现代微生物发酵和研究的内容： 1）菌种的选育及扩大 2）最经济地利用环境中的营养物，按照微生物需要确定种子培养基和发酵培养基的配方 3）培养基和发酵罐、辅助设备的灭菌 4）发酵罐中微生物在最优条件下产物的大规模生产 5）发酵产物的提取和纯化 6）发酵工业废液及废料的处理、再生和生产环境的净化等。 3、微生物发酵的特点： 1)发酵的催化作用都在细胞内进行（副产品少，可减少环境污染） 2)很大的比表面积（S：V≈104，营养物质能够迅速转移到细胞内，维持较高的代谢速度） 3)原料来源广，且价格低廉 （微生物生长的主要原料为为碳源，来源广，产量大，目的产物成本低） 4)反应条件温和，生产过程安全 （微生物发酵过程是在生物体内利用酶的催化作用进行的，反应条件温和且产品的转化率高） 5)设备“多能性”，代谢途径多样化（不同微生物发酵产品可用同一设备或稍加改造就可生产） 6)具有易变异性（可利用基因工程，物理，化学诱变等方法，改变微生物的遗产特性，调节和控制代谢途径，得到原来不能生产的产物） 4、现代微生物发酵工程的应用： 1）营养丰富的发酵食品日益增多 2）医药和保健食品蓬勃发展 3）减缓资源、能源危机 4）深入广泛的改善环境 5）农业的广大幅增产 微生物的菌种选育和保藏 1、诱变育种p18 1）定义：诱变育种是利用物理、化学或生物等方法，使诱变对象细胞内遗传物质发生变化，引起突变，并通过筛选获得符合要求的变异菌种的方法。 2）诱变步骤： 10出发菌种的选择 来源： eq \o\ac(○,1)自然界直接分离得到的野生型菌株  eq \o\ac(○,2)经历过生产条件考验过的菌株 ?经过多次诱变改造的菌株 特点:  eq \o\ac(○,1)对诱变剂敏感  eq \o\ac(○,2)具有特定生产性状的能力 20菌悬液的处理  eq \o\ac(○,1)处于对数生长中期的菌  eq \o\ac(○,2)细胞尽量均一分散 30诱变剂的处理 3）操作程序： 出发菌种——纯化——培养液（离心收集菌种，洗涤，制备菌悬液，玻璃珠打散，过滤） 细胞或孢子悬液活细胞计数 诱变剂处理 存活细胞计数，致死率计算 平板分离——初筛——复筛——生产性能试验——菌种保藏 4）影响因素 10选择出发菌株 20采用分散状态的悬浮液处理 30采用单核细胞处理 40注意微生物的生理状态 50诱变剂的选择及最适剂量的选择 2、紫外线诱变p22 1）原理 紫外线能够引起DNA分子结构发生改变（同链的DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而影响菌体遗传性变异。 2）条件 过量紫外线照射会造成菌体丢失大段的DNA或使交联的DNA无法打开，不能复制和转录，从而引起菌体死亡。故小剂量照射可作为诱变剂。一般使用20w的紫外灯管。 3）光复活作用： 定义：可见光能激活某些光复活酶，将经紫外线照射后的微生物受损伤DNA部分进行修复称为光复活作用。 原理：光复活酶能识别嘧啶二聚体，并利用光能使二聚体环打开而完成修复。 3、原生质体的融合：人为地使遗传性状不同的双亲株的微生物细胞分别通过酶解脱壁，使之形成原生质体，然后在高渗溶液的条件下混合，并在物理的或化学的或生物的助融条件下，使双亲株的原生质体发生相互凝集，称为融合。 4、菌种退化：微生物在较长时间传代保藏后，由于变异的存在，其生理状态及形态特征减退或消失的现象。 5、菌种复壮：p36 在菌种已退化的情况下，通过纯种分离和测定生产性能等，从退化的群体中分离出尚未退化的细胞，以达到恢复该菌原有的优良性状。 6防止菌种退化的方法： 减少传代次数。 尽量减少不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以此减少自发突变的概率。 良好的培养条件。 培养条件要有利于生产菌株，不利于退化菌株的生长。 利用不同类型的细胞接种传代。 选择适合的保藏方法。 第三章 微生物发酵的代谢调节和控制 1、分解代谢产物阻遏：有两种碳源（或氮源）底物同时存在时，细胞先利用速效的那种底物而阻遏迟效的那种底物的分解的酶合成现象。 2、二次生长效应（为什么先利用葡萄糖，后利用乳糖？用上述分解代谢产物阻遏现象即可解释。以下重在理解。。。）