第三章基因的保持DNA復制与损伤修复.pptVIP

基 因 的 保 持 Gene maintenance;第三章 DNA复制与损伤修复;第一节 DNA复制;一、DNA复制概述 二、DNA复制相关物质 三、DNA复制的起点、方向和速度 四、半不连续复制 五、 DNA的复制过程（大肠杆菌为例） 六、DNA复制的其它方式 七、真核生物中DNA的复制特点 八、DNA复制的调控（自学）;一、 DNA复制概述;DNA复制可能的三种方式;DNA的半保留复制 （semi-conservative replication）; 中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试： 请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的（8分）。 ;半保留复制的实验证据（1958 ）;Meselson 和Stahl将同位素15N标记的15NH4Cl加入大肠杆菌的培养基中培养15代，使大肠杆菌的DNA都带上15N的标记，然后将该大肠杆菌转入14N的普通培养基中培养后，分离子代DNA,进行氯化铯密度梯度离心。;DNA复制可能的三种方式 以及Meselson和Stahl实验的可能结果;半保留;Meselson 和Stahl实验的实际结果 ;二、与DNA复制有关的物质;5、DNA聚合酶 (DNA Polymerase)： 以DNA为模板的DNA合成酶。;原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌）;DNA pol III的聚合和校对;真核生物中的DNA聚合酶（哺乳动物）;DNA聚合酶α主要参与引物合成。; 6、DNA连接酶 (DNA ligase)： 催化双链DNA切口处的3?-OH和5 ?-磷酸基生成磷酸二酯键，完成链与链之间的连接。;7、DNA 拓扑异构酶 (DNA Topisomerase)：;II型DNA拓扑异构酶的作用机制;上海生化所1998年分子遗传学试题： 拓扑异构酶;8、DNA 解螺旋酶/解链酶 （DNA helicase);9、单链结合蛋白(single-strand binding protein, SSBP)：;链内氢键;三、DNA复制的起点、方向和速度;复制子（Replicon）：从复制起点到终点，组成一个复制单位。一个复制子只含一个复制起点。;部分生物复制子的比较;复制叉（Replication fork）：复制时，解链酶等先将DNA的一段双链解开，形成复制点，这个复制点的形状象一个叉子，故称为复制叉。;复制方向和速度; 无论是原核生物还是真核生物，DNA的复制主要是从固定的起始点以双向等速复制方式进行的。复制叉以DNA分子上某一特定顺序为起点，向两个方向等速生长前进。;？;四、半不连续复制（Semi-discontinuous replication）;前导链(leading strand)：以复制叉向前移动的方向为标准，合成方向与复制叉移动的方向一致并连续合成的链为前导链。;DNA的半不连续复制 ;五、DNA的复制过程 （大肠杆菌为例）;大肠杆菌基因组以双链环状DNA分子的形式存在，其DNA复制的中间产物可形成一个θ，复制从定点开始双向等速进行 (θ型复制) 。;(一) 复制起点;(二) 复制的起始;②大约20个起始蛋白DnaA在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合，形成起始复合物。;③ 在类组蛋白（HU）和ATP参与下, DanA蛋白使3个13bp直接重复序列变性，形成开链复合物。;④ 借助于水解ATP产生的能量和在DnaC的帮助下，解链酶DnaB六体分别与两条单链DNA相结合，进一步解开DNA双链。;⑤ SSB蛋白四聚体结合到单链上，形成预引发复合物/预引发体。;⑥引物酶DnaG加入形成引发体。;2、 RNA引物的合成;2002年上海生化与细胞所 基因组DNA复制时，先导链的引物是DNA，后随链的引物是RNA ( );3、复制体的组装;起始复合物;(三) 新链的延伸;1、前导链的合成;2、后随链的合成（冈崎片段的合成）;3、冈崎片段引物的切除、缺口的填补和切口的连接;4、协同复制机理;E. Coli中 DNA复制的延伸 ;(四) 复制的终止;链的终止（Termination）;E. coli DNA复制终止区的结构 ;2、子代DNA的分离 ;六、DNA复制的其他方式;1、环状DNA双链的复制-θ型;如：ΦΧ174的双链环状DNA复制型（RF）;Rolling circles produce multimers of a replicon;负链的合成：;3、D-环型(D-loop);七、真核生物中DNA的复制特点;3、真核生物DNA复制速度比原核慢，速度约为 50 bp/s (仅为原核生物的1/20~1/50）。