第章復制＝.pptVIP

第三章 DNA复制;遗传物质的分子机制;生物体的遗传信息以密码的形式编码在DNA分子上，表现为特定的核苷酸排列顺序； 遗传信息通过DNA的复制由亲代传递给子代； DNA双螺旋模型的提出是DNA复制的理论基础。 ;复制的复杂性 ;1 DNA的半保留复制 2 复制单位、起点和复制方式 3 复制速度 4 引物 5 DNA的半不连续复制 ;1 DNA的半保留复制（semi-conservative ~）;;1.1 概念 复制时，DNA两条链解开，以每条链为摸板，按碱基互补配对原则合成互补链，形成的两个子代DNA分子与原来的亲代DNA分子完全相同，每个子代DNA分子中一条链来自亲本，一条链为新合成的。 ;1.2 实验依据： Meselson Stahl (1958) E.coli :放射性同位素（15N）标记CsCl密度梯度离心;;DNA分子上每一条链都含有合成它的互补链所必需的全部遗传信息 半保留复制是双链DNA普遍采用的复制机制 在半保留复制中碱基配对是核酸分子间传递遗传信息的结构基础 DNA分子在代谢上是稳定的 ;1.3 生物学意义： 保证DNA代谢的稳定性。经过多代的复制，子代DNA仍可以保持与最初亲本的一致性。 稳定性是相对的，变异是绝对的;2、复制单位、起点和复制方式;根据：越靠近origin 的基因转导的频率越高 ;单起点、单方向;;确定复制方向实验autoradiography E.coli ;Different densities of radioactive labeling can be used to distinguish unidirectional and bidirectional replication.;真核生物染色体DNA 线性双链 多复制子 病毒DNA 形态多样（环形、线形、双链或单链） 复制方式多样（双向、单向、对称或不对称） 生物染色体多为双向对称式复制 例外：Bs—双向，但两复制叉移动距离不同 滚动环式（噬菌体X174DNA）和D－环式（线粒体DNA）是单向复制的特殊形式。 ;真核生物复制叉移动的速度～1000-3000bp/min; 原核生物复制叉移动的速度～50,000bp/min 真核生物比原核生物慢? （复制时解开核小体，复制后又重新形成核小体）;4、引物（primer）;引物是一段同模板DNA配对的短核酸序列，为DNA合成提供3’-OH末端 ;E.coli; M13 RF的形成需要 RNA polymerase合成一段RNA分子作为引物； ;引物;3’;1968年，冈崎：3H-dTTP标记 + 碱性密度梯度离心：发现短时间内分离的DNA中有大量1000nt的DNA小片段；一段时间后，检测到 DNA大片段。 DNA ligase 变异的温度敏感菌株，在ligase不起作用的温度下，有大量的DNA短片段积累。 说明：DNA复制中先合成较短片段（冈崎片段），再连成长链DNA。 ;冈崎片段的数量新合成DNA的一半，原因：U代替T掺入到DNA中造成。DNA中的U被糖苷酶切除，随后进行修复。此过程可产生一些小片段。 糖苷酶变异株，DNA中的U不再被切除→新合成DNA一半出现于冈崎片段；另一半直接进入大的片段。 说明：DNA复制时，一条链连续，另一条链不连续。即半不连续复制。 ;5.2 概念：DNA复制时，前导链的合成是连续的,而后随链的合成是不连续的，这种复制方式称为半不连续复制;前导链(leading strand)—DNA复制时，合成方向与复制叉移动的方向一致并连续合成的链。 后随链(lagging strand) —DNA复制时，合成方向与复制叉移动的方向相反，形成许多不连续的冈崎片段，最后再连成一条完整的DNA链。 冈崎片段：DNA复制过程中，由DNA聚合酶合成的可连接为后随链的DNA短片段。 原核生物1000-2000nt(一个顺反子的长度)， 真核生物100-200nt（核小体的长度）。 ;n1dATP n2dGTP n3dCTP n4dTTP;底物: dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 模板:　单链的DNA母链 RNA引物:　寡核苷酸 (10nt－60nt) DNA聚合酶: 其他酶和蛋白因子:引物酶、解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶　　;2 E.coli DNA复制的酶体系;2.1 DNA聚合酶;;单体酶, 多功能酶。 具有5’? 3’聚合酶功能（对dNTP的选择）； 3’? 5’外切酶活性（校对功能） 5’? 3’外切酶活性 功能：DNA损伤的修复，DNA复制时RNA引物切除及其空隙的填补;5’至3 ’的聚合活性（ 5 ’ → 3 ’ ）：3