食品及饲料中马属动物源性成分的PCR检测研究.pdfVIP

中 国 生 物 工 程 杂 志 第 24 卷第 5 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2004 年 5 月 食品及饲料中马属动物源性成分的 PCR 检测研究* 1* * 1 1 1 2 陈 颖 吴亚君 徐宝梁 马 颖 董 萌 (1 中国进出口商品检验技术研究所 北京 100025 2 四川大学 成都 610044) 摘要 采用马和驴 mtDNA 中特异性片段引物, 利用聚合酶链反应技术 ( polymerase chain reaction, PCR) , 建立了饲料 中马属 动物源性 动物成分 的快速检 测方法。通过内切 酶 Hae ó、Sau3A 和 Alu ?可对扩增结果进行验证并能够区分马成分和驴成分。扩增产物测序结果表明: 驴扩增产物 序列与数据库序列完全一致, 马样品扩增产物与数据库序列的同源性达 99%。该方法的检测低 限分别为 015%( wPw) 和 0125% (wPw) , 可作为食品及饲料中马属动物成分鉴别检测的有效方法。 关键词 饲料 马属 动物源性成分 PCR 检测 肉骨粉是牲畜屠宰后其毛纤维、皮革、角质、骨 用 PCR 技术快速检测动物源性饲料中牛源性成分 骼、脏器等非实用组织经由高温蒸煮后再挥干水分 的方法[ 10] 。日本研究者利用 1 条正向引物和 6 条 的成品, 是极其重要的动物蛋白饲料, 在养殖领域 反向引 物, 建 立 了快 速、简 单 PCR 方 法, 样 品经 使用极为广泛。食用以动物源性成分为饲料的肉 120 e 处理 30min 后, 尚能鉴 别牛、猪、鸡、绵羊、山 骨粉, 一 直 被 认 为 是 牛 海 绵 状 脑 病 ( bovine 羊肉制品, 但不能检测马肉 制品[ 11] 。国内有关于 [12, 13] spongiform encephalopathy, BSE ) 得 以传播 的主 要途 饲料 中牛、羊 、猪、鸡、马 源性 成 分的 检 测报 [ 14] 径。自 1986 年首例疯牛病在英国报 道以来[ 1] , 特 道 , 但对马的检测尚缺乏简便的验证方法, 且不 别是发现 人新 变异 型克 - 雅氏 病与疯 牛病 有关 能区分马和驴。 后[ 2] , 这一疾 病已成为 全世界关 注的公共 卫生问 本研究拟采用马属动物线粒体 DNA 特定片段 题。迄今为止, 几乎每年都有发现疯牛病的报道。 引物, 建 立饲料中马属动 物成分( 马和 驴) 的 PCR 英国、美国、欧盟等世界各国和国际组织已纷纷出 检测方法, 旨在能快速、简便、准确、特异灵敏地检 台政策, 禁止在动物饲料中含有反刍动物成分, 反 测出饲料中马属动物 ( 马 和驴) 成分, 达到严把国 刍动物饲料中 含有哺乳动物 肉骨粉