第1章脑科学研究的方法讲解.ppt

多学科综合 ;多层次的研究 ;研究水平;一、形态学方法 二、生理学方法 三、电生理学方法 四、生物化学方法 五、分子生物学方法 六、脑成像（Brain imaging）技术 ;一、形态学方法;1.常用普通染色方法;HE（苏木素－伊红）;锇酸染色是神经科学研究的一种常用而普遍的方法，它本来是用来固定脂质的，由于髓鞘的主要成分是脂质，所以用于有髓神经纤维的染色 ;氯化金浸染;Cajal银浸染色;尼氏染色;2、束（通）路追踪法：研究神经元之间的联系 ;束路追踪;轴浆运输法—利用神经元轴浆运输现象的追踪法. 追踪剂：辣根过氧化物酶(horseradish peroxoidase, HRP)、荧光染料包括核黄(nuclear yellow)、固蓝(fast blue)及荧光金(fluorogold)、植物凝集素如麦芽凝集素(wheat germ agglutinin, WGA)和菜豆凝集素(phaseolus vulgaris agglutinin)、细菌毒素如霍乱毒素、病毒如活的神经病毒 (胞疹病毒和弹状病毒） ;l?变性法：利用神经元包体受损或神经轴突离断后远侧轴突的变性，或轴突切断后细胞的反应，来研究纤维的联系。 *物理性方法：刀的切割、电凝、电离破坏、超声破坏等。 *化学性破坏：兴奋性氨基酸（海人酸和鹅高蕈氨酸）、单胺类神经毒（６－羟多巴胺、６－羟多巴、双羟色胺） ;;最新研究进展：华人学者绘制小鼠大脑神经网络图;;我们真的会永远不老吗？——从“科学狂人”的抗衰老研究说起;;;;;3、荧光组织化学法 ;;免疫组化;核酸分子杂交技术，检测细胞内mRNA和DNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。 基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点，应用已知碱基序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针（probe），与组织切片或细胞内的待测核酸（RNA或DNA片段）进行杂交，通过标记物的显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。;此项技术需首先制备某种核酸探针，其种类主要有三种：①利用大肝杆菌重组带有目的基因的质粒DNA，制成互补DNA探针(cDNA)；②应用限制性核酸内切酶消化制成线性DNA模板，在体外转录获得反义RNA探针(cDNA)；③依照待测核酸的核苷酸序列，应用DNA合成仪合成寡聚核苷酸探针。 cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32P、3H等放射性核素和荧光素、生物素、地高辛等非放射性物质。;组织学应用的原位杂交术主要是染色体原位杂交和细胞原位杂交。前者是研究遗传基因、抗原基因、受体基因、癌基因等在染色体上的定位与表达；后者是研究细胞某种蛋白质的基因转录物mRNA在胞质内的定位与表达。 核酸分子杂交术有很高的敏感性和特异性，它是免疫细胞化学的基础上，进一步从分子水平探讨细胞功能的表达及其调节机制的，已成为当前神经生物学研究的重要手段。;5、受体定位法：研究受体在神经系统内的定位 ;6、神经系功能活动形态定位法 ;;;二、生理学方法 ;1、神经递质释放量的测定（在体in vivo和离体in vitro);;;;; 抗体微探针法：是在玻璃微电极上涂上一层神经肽抗体，用于在中枢神经系统内定位神经肽的释放。;脑片灌流法突触体灌流法;2、神经递质的功能测定 ;3、行为学方法 ;Behavioral neuroscience is the study of the neural mechanisms mediating normal and abnormal behaviors. 自主活动 动物焦虑检测：实施焦虑因素，如饮食或饮水剥夺，检测反应，可以用于药物筛选。 性和生殖行为：进化，神经内分泌作用机制 学习记忆 摄食行为 惊恐反射 社会行为 ……..;自主活动箱实验;自主活动箱实验;洞板实验;学习记忆的行为学检测;学习记忆功能检测的常用实验程序; Morris迷宫;Morris水迷宫 ;Morris水迷宫;Morris水迷宫;Morris水迷宫的优点;Morris水迷宫的不足之处;Lashley III水迷宫;Lashley III水迷宫;八臂放射状旱迷宫;八臂放射状旱迷宫;八臂放射状旱迷宫;八臂放射状旱迷宫;穿梭箱实验;穿梭箱实验;跳台试验;跳台试验;三、电生理学方法 ;;;;SG:信号发生器，FBA:反馈放大器，V监测膜电位;;膜片钳（patch clamp） ;膜片钳;经典记录模式： 贴附式（Cell-attached 或 on cell) 内膜向外式(Inside-out) 外膜向外式(