11 第十一讲1 植物脱毒技术.ppt

植 物 脱 毒 技 术 ; ;;甘蔗黑穗病;甘薯种性退化;甘薯种性退化;马铃薯病毒病 ;花卉;;;;; 危害一些植物的病毒数目; 所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。 ;第一节 脱毒方法;一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 离茎尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。;;（二）茎尖脱毒方法 1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3～5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%次氯酸钠或5% ～ 7%的漂白粉溶液消毒10 ～ 20min，最后用无菌水冲洗材料4 ～ 5次。; 2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上 解剖镜下剥去幼叶 切下带1～2个叶原基的生长点（0.3～0.5mm） 切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。;3、培养条件 25+2℃ ，1500-4000LX 4、生根诱导 诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1 ～ 2个月可生根。 ;（三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养; 用于脱毒的适宜茎尖大小;二、热处理脱毒 脱毒原理： 一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40 ℃ ）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法  材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材???受伤。 适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。  ;2、热空气处理脱毒法  将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。 特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间 适用：多数植物 ;3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。 适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒。 ;三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因： ①是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖； ②是愈伤组织发生了抗病毒突变。 ;（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。（三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.1-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。 脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗培养——移植。; 第二节 脱毒苗鉴定一、直接检查法 直接观察待测定植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。;一些常见病毒病引起的可见病症;二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。  特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。;几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状;（一）草本植物鉴定 1、汁叶涂抹法 被鉴定植物取1～3克幼叶加10ml水及少量磷酸缓冲液-研碎过滤-加金钢砂作磨擦剂-汁液在叶面上涂抹2～3次接种 2、小叶嫁接法 指示植物作砧木，被鉴定植物小叶作接穗，常用劈接法。 （二）木本指示植物鉴定 直接在指示植物上嫁接待检