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12DNA的生物合成 (复制)
第十一章DNA的生物合成 (复制)DNA Replication;DNA;DNA的生物合成:细胞内合成DNA的过程
1、复制:以DNA作为模板指导的DNA合成,即将DNA携带的信息传至子代DNA。
2、 反转录:DNA合成也可以RNA为模扳指导合成作用,见于RNA病毒。
3、修复合成:当各种因素引起DNA损伤时,损伤DNA可修复合成,校正错误,完成正确合成,以保持DNA结构 的稳定性和遗传信息的准确性。 ;第一节 DNA 复制
一、复制的特征
(一)半保留复制---semiconservative replication
两个子代分子中各有一条链来自亲代,各有另
一条新合成的链,这种复制方式叫半保留复制。
[提问]? DNA的合成是否为全保留复制方式?
? DNA的合成是否为混合式复制方式?
? DNA的合成是否为半保留复制方式?
[实验证据]:1957年 M.Meselson 和F.W.Stahl用大
肠杆菌为材料,在含15N和14N的NH4cl中培养证实
了半保留复制方式。(图11-1)
Cscl梯度离心的结果。(图11-2 );(二)复制的起始点与方向
亲代DNA开链,复制起始点呈叉型移动。(图11-3)
1、复制起始点: DNA复制要从DNA分子的特定部位
开始,此部位称复制起始点。(图11-3加)
原核:仅含一个 ,约245 bp,特殊的重复序列。
真核:多个起始点 例:酵母17号染色体含400个。
2、复制方向:含三种机制
?2个起点,2个叉,各合一条链(腺病毒)。
?一个起点一个叉,同方向合成两条链(质粒ColEI
?一个起点2个叉,不同方向合成两条链,此为常
见方式。(图11-4);(三)半不连续合成semidiscontinuous replication ;二、复制过程和参与酶及因子
(一)复制的起始(分两步)
1、螺旋的松弛与解链
(1)拓扑异构酶---能改变DNA空间构型的酶
作用: DNA复制时松弛超螺旋,以利复制叉的行进及DNA合成,合成后再引向超螺旋。
功能:不清楚,可催化体外拓扑异构化反应,分两型。;?拓扑异构酶I (topoisomerase-- I )
作用:(图11-6加)
松弛超螺旋,不需ATP, 机制:切开环状一条链
打结与解结
环状双链DNA的合成
环连与解环连
原核:对负超螺旋?正
真核:对正、负均有作用。
?拓扑异构酶I I ----旋转酶(gyrase)
作用:
松弛超螺旋 松 + ATP 超 ( - ) 切开环状两条链;打结与解结
环连与解环连 (图11-6)
(2)解链酶 (helicase)------复制蛋白rep
作用:ATP供能时,解开DNA双链。
原核:编码解链酶的基因是dnaB,DnaB表示蛋白产
物。前导链结合rep蛋白,随从链 结合解链酶II Ⅲ
(图11-7)。
(3)单链结合蛋白-single strand binding protein-SSB
作用: ? SSB与解开DNA单链结合,保护稳定DNA。
?与新复制DNA单链结合,以防降解。
超螺旋DNA 拓扑酶 松弛 解链酶 解开双链 SSB 复制开始;2、引发 (需引发酶及引发前体参与)
(1)引物酶(primase)
作用:以DNA为模板,自5’?3’合成RNA小片段,
3’末端为-OH,长短:十几到几十个核苷酸。
原核:dnaG基因编码DnaG蛋白即引物酶。
(2)引发前体(preprimosome)
由多种蛋白因子组成复合物。
作用:合成RNA引物,沿随从链复制叉的行进方向移动,在不同部位,合成RNA引物。
总结:合成RNA引物,在引物3’-OH末段进行DNA片
段合成。(表11-1)
(二) DNA链的延长
反应体系: DNA模板, DNA聚合酶, dNTP,引物,Mg2+离子
;过程:引物3’-OH dNTP ? ppi 引物-dNMP
反应式:DNA+dNTP ?(DNA)n+1+ppi
反应机理:(图11-8加1)?磷亲核攻
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